細胞的凍存方法
一個實驗室得到一個新的細胞株后，首先要把該細胞株培養(yǎng)擴增后凍存起來。細胞凍存首先可以在由于污染等情況丟失細胞時有備份可用，另外幾乎所有細胞在培養(yǎng)傳代的過程中發(fā)生一定程度的變異，為了保持實驗結果的一致，一般細胞在培養(yǎng)幾十代以后就不能再使用了，需要將凍存的，傳代較少的細胞化凍培養(yǎng)再使用。
細胞冷凍過程有四個要點：細胞的收獲、保護劑的使用、冷凍速率和儲存環(huán)境。
在這里給大家簡述下這個四個要點：
細胞的收獲
用來凍存的細胞一般選擇在細胞約鋪滿90%的時候，這時細胞生長狀態(tài)好，細胞數量也多，并且在收獲細胞前24小時換一次培養(yǎng)液。收獲用來凍存的細胞開始時方法和平時一樣，用100xg離心5分鐘收集細胞再重懸，活細胞記數。稀釋或濃縮到細胞保存的zui終細胞濃度的二倍（一般是400-1000萬細胞/ml），加入已經配好的等體積的培養(yǎng)液保護劑混合溶液中輕輕混勻，分裝到凍存管，冷凍保存。
保護劑的使用
細胞凍存中，一般使用DMSO作為保護劑。在細胞凍存中，DMSO使用的zui終濃度一般是5-15%，某種具體細胞的凍存液中的DMSO濃度可以從ATCC查到。對特別敏感的細胞特別是雜交瘤細胞在凍存時使用95%血清和5%DMSO可能會好些。保護劑在使用時先用培養(yǎng)液或血清配成zui終濃度的2倍，再與等體積的懸浮細胞的培養(yǎng)液混合。
細胞凍存的速率
細胞的冷凍速率zui是控制在讓細胞有足夠的時間脫水而又不被過度脫水導細胞損害。對大多數細胞來說，每分鐘降1至3℃是合適的。通常的操作是把細胞先在-20℃1-2個小時，再放入-80℃冰箱過夜（如果沒有-80℃冰箱，可以用干冰替代），再轉入液氮罐或低于-130℃的冰箱長期保存。
另外一個辦法是，在-20℃1-2個小時以后，把冷凍管懸掉在液氮罐的氣相中，以控制冷卻的速率。這個方法比較簡單，因為細胞也可以在液氮罐的氣態(tài)中長期保留，所以不用計時。對于沒有-80℃冰箱，或者購買干冰不方便的人來說，這是一個比較好的辦法。
儲存環(huán)境
細胞長期保存溫度是-130℃或更低。液氮罐中氣態(tài)層溫度在-140℃至-180℃之間，細胞可保存在氣態(tài)層或浸入液氮中，如果可能保存在氣態(tài)層，因為這樣可避免由于有液氮進入凍存管而在拿出細胞時引起爆炸（但是這樣液氮罐內只能存儲少量液氮，需要經常添加）。細胞也可以在-80℃冰箱保存幾個月左右的時間。
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