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elisa試劑盒檢測樣本的原理和步驟

2012-9-17　

　　elisa試劑盒檢測樣本的原理和步驟
　　
　　表達產(chǎn)物的檢測
　　
　　如果采集的實質(zhì)器官則要求：
　　
　　1、器官實質(zhì)不能太小
　　
　　2、以采集實質(zhì)性病灶區(qū)為佳：如淋巴結(jié)、心臟、非、肺、脾以及腸管等病毒、病菌聚集的地方為佳
　　
　　3、同一病例裝入同一容器，并做好標(biāo)記
　　
　　4、應(yīng)在0-8℃的低溫儲存和運輸
　　
　　5、實質(zhì)性器官的處理：
　　
　　5.1、取實質(zhì)性器官約0.5mg左右，充分剪碎或研磨
　　
　　5.2、加入約500ul的PBS/生理鹽水，充分混勻
　　
　　5.3、離心5000rmpx10min，去上清
　　
　　5.4、-20℃保存，作為待檢標(biāo)本（切勿反復(fù)凍融）
　　
　　二．體液（常見的包括血清、血漿、唾液以及尿液等）的處理方式
　　
　　1、血液包括血漿和血清，它們的主要區(qū)別就是：血清凝血而血漿不凝血，所以它們的處理方式也就不一樣
　　
　　1.1、采集血漿時一般不加抗凝劑（主要為枸櫞酸鹽和檸檬酸鹽），采集后立即離心800-1000rmpx5min分離，取上清，-20℃或4℃保存?zhèn)溆茫?br />　　
　　1.2、如要采集血清，一般要加入總體積1%的抗凝劑，采集后先室溫或4℃靜置半小時后，800-1000rmpx5min分離，取上清，-20℃或4℃保存?zhèn)溆茫?br />　　
　　2、胃液和唾液的采集方式一般現(xiàn)采現(xiàn)用，但是一般飯后半小時內(nèi)不易采集，因為剛進食的唾液中富含豐富的唾液淀粉酶，的采集的時間時空腹采集；
　　
　　3、尿液的采集方式基本和唾液一樣的，即現(xiàn)采現(xiàn)用，但是一般隔夜尿不采集；
　　
　　4、組織提取液如肺泡灌洗液等，采集后離心分離，800-1000rmpx5min，取上清，-20℃或4℃保存?zhèn)溆茫?br />　　
　　三．糞便以及天然孔排泄物：采集后一般現(xiàn)用PBS/生理鹽水溶解，充分混勻，800-1000rmpx5min分離，取上清，-20℃或4℃保存?zhèn)溆茫?br />　　
　　四．活檢組織一般進行穿刺檢測，zui常見的就是肝活檢，像病毒性肝炎、脂肪肝、各種類型的肝硬化等進行活檢簡單方便、準(zhǔn)確。
　　
　　真核表達產(chǎn)物
　　
　　1、細胞上清（分泌性蛋白）
　　
　　1.2、貼壁細胞或半貼壁，直接將細胞培養(yǎng)上清吸出，10000rmpx10min，取上清，-20℃或4℃保存，作為標(biāo)本進行檢測，如有需要可進行透析或純化處理；
　　
　　1.2、不貼壁細胞，將培養(yǎng)基和細胞轉(zhuǎn)移至10ml離心管，500-800rmpx10min，吸取上清至另一10ml離心管中，10000rmpx10min，-20℃或4℃保存，作為標(biāo)本進行檢測，如有需要可進行透析或純化處理；
　　
　　2、細胞裂解物（非分泌性蛋白）
　　
　　2.1、貼壁細胞或半貼壁，直接將細胞培養(yǎng)上清吸出，然后用001MPBS（pH7.4）將細胞吹下至10ml離心管，500-800rmpx10min，棄上清，沉淀轉(zhuǎn)移至1.5ml離心管中，DDW重懸，置冰水浴中用超聲波裂解儀進行裂解，10000rmpx10min，取上清，-20℃或4℃保存，作為標(biāo)本進行檢測，如有需要可進行透析或純化處理；
　　
　　2.2、不貼壁細胞，將培養(yǎng)基和細胞轉(zhuǎn)移至10ml離心管，500-800rmpx10min，棄上清，沉淀移至另一10ml離心管中，0.01MPBS（pH7.4）重懸，500-800rmpx10min，棄上清，沉淀移至1.5ml離心管中，DDW重懸，置冰水浴中用超聲波裂解儀進行裂解，10000rmpx10min，取上清，-20℃或4℃保存，作為標(biāo)本進行檢測，如有需要可進行透析或純化處理。


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