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測定意義

甜菜堿是一種廣泛分布于動植物及微生物體內(nèi)的季銨型水溶性生物堿，是生物體內(nèi)的氧化產(chǎn)物，可以增強免疫力、降血脂、抗氧化、抗腫瘤，并可作為甲基供體，參與促進(jìn)動物蛋白質(zhì)和脂肪代謝、增進(jìn)食欲、緩和應(yīng)激、調(diào)節(jié)滲透壓、穩(wěn)定維生素等多種生物作用，在化工、醫(yī)藥、食品添加劑等領(lǐng)域有較廣泛的應(yīng)用。

測定原理

甜菜堿在強酸條件下和雷氏鹽發(fā)生反應(yīng)產(chǎn)生沉淀，沉淀用丙酮溶解形成紅色溶液，在525nm處有特征吸收峰，測定525nm處的吸光值，可計算得樣品的甜菜堿含量。

自備實驗用品及儀器

天平、離心機、酶標(biāo)儀、96孔板、鹽酸、丙酮和蒸餾水。

試劑組成和配制

提取液：液體30mL×1瓶 ，4℃保存；

試劑一：粉劑×3瓶，4℃保存；臨用前根據(jù)用量配制，每瓶加20mL蒸餾水溶解，加390μL濃鹽酸調(diào)pH為1。

試劑二：99%乙，自備。取無水乙59.4mL，加入蒸餾水0.6mL，混勻。

試劑三：70%丙酮，自備。（易揮發(fā)，根據(jù)用量自備，丙酮：蒸餾水=7:3）。

甜菜堿提取

取烘干后過40目篩的樣品約0.02g，加0.8mL水，置于60℃提取30min，期間不斷震蕩。再加入200µL提取液，混勻后10000g，25℃，離心10min，取上清液。

測定操作表

1. 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長至525nm。

2. 操作表

甜菜堿含量計算公式

標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y = 0.502x + 0.0057，R2 = 0.9993；x為甜菜堿濃度（mg/mL），y為吸光值。

甜菜堿含量（mg/g 干重）=（ΔA-0.0057）÷ 0.502× V標(biāo)準(zhǔn)÷(V樣÷V樣總×W)

                  =1.99×（ΔA-0.0057）÷W

V標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)品體積，0.3mL；V樣：反應(yīng)中樣本體積，0.3mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；W：樣本質(zhì)量，g

注意事項

1. 試劑一配制時pH嚴(yán)格控制為1，否則會導(dǎo)致反應(yīng)不全，配制后4℃只能穩(wěn)定幾個小時，配制后盡快使用。

2. 試劑二與試劑三對呼吸道有一定的刺激，請做好防護(hù)工作。

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