酶聯(lián)免疫吸附試驗（Enzyme-Linked ImmunosorbentAssays,ELISA）以來，由于ELISA具有快速、敏感、簡便、易于標準化等優(yōu)點，使其得到迅速的發(fā)展和廣泛應(yīng)用。盡管早期的ELISA由于特異性不夠高而妨礙了其在實際中應(yīng)用的步伐，但隨著方法的不斷改進、材料的不斷更新，尤其是采用基因工程方法制備包被抗原，采用針對某一抗原表位的單克隆抗體進行阻斷ELISA試驗，都大大提高了ELISA的特異性，加之電腦化程度高的ELISA檢測儀的使用，使ELISA更為簡便實用和標準化，從而使其成為廣泛應(yīng)用的檢測方法之一。
基本原理：
ELISA方法的基本原理是酶分子與抗體或抗抗體分子共價結(jié)合，此種結(jié)合不會改變抗體的免疫學特性，也不影響酶的生物學活性。此種酶標記抗體可與吸附在固相載體上的抗原或抗體發(fā)生特異性結(jié)合。滴加底物溶液后，底物可在酶作用下使其所含的供氫體由無色的還原型變成有色的氧化型，出現(xiàn)顏色反應(yīng)。因此，可通過底物的顏色反應(yīng)來判定有無相應(yīng)的免疫反應(yīng)，顏色反應(yīng)的深淺與標本中相應(yīng)抗體或抗原的量呈正比。此種顯色反應(yīng)可通過ELISA檢測儀進行定量測定，這樣就將酶化學反應(yīng)的敏感性和抗原抗體反應(yīng)的特異性結(jié)合起來，使ELISA方法成為一種既特異又敏感的檢測方法。
一、試劑的影響因素：
應(yīng)選用有國家批準文號，質(zhì)量靠得住的產(chǎn)品，不能圖便宜，忽視質(zhì)量保證。試劑應(yīng)妥善保存于4℃冰箱內(nèi)，在使用時先平衡至室溫，不同批號的試劑組分不宜交叉使用。試劑開啟后要在一周內(nèi)用完，剩余的試劑下次用時應(yīng)先檢查是否變質(zhì)，，顯色劑如被污染變色將造成全部顯色，導(dǎo)致錯誤結(jié)果。過期的試劑不宜再用，若別無選擇，應(yīng)做好雙份質(zhì)控品的監(jiān)測，確保結(jié)果的可靠性。
二、影響因素：
酶聯(lián)免疫(ELISA)是目前檢驗科常用的免疫學檢測方法之一，其操作簡單，無須特殊設(shè)備，使其在各級醫(yī)院都有應(yīng)用。但是，如果忽視了影響其結(jié)果的因素，難免會造成假陰性或假陽性，因此，了解影響實驗的因素，減少差錯事故的發(fā)生是極其必要的。
三、實驗室操作人員的素質(zhì)因素：
實驗室人員的素質(zhì)主要包括五個方面：思想素質(zhì)、文化素質(zhì)、技術(shù)素質(zhì)、心理素質(zhì)、身體素質(zhì)。首先應(yīng)具備一個良好的思想素質(zhì)，因為我們的服務(wù)對象是人，我們的道德水平直接關(guān)系到人們的健康和生命安危，如果馬馬虎虎。三心二意，難免會有差錯事故發(fā)生，我們應(yīng)該熱愛專業(yè)，耐心細致。在工作中如標本混淆、張冠李戴、報告單發(fā)錯等都有可能造成嚴重后果；其次文化素質(zhì)和技術(shù)素質(zhì)，我們要熟練掌握本專業(yè)的基本理論和基本技術(shù)，認真學習新理論新知識，努力提高自己的業(yè)務(wù)水平，創(chuàng)造一個能夠勝任本職工作的技術(shù)平臺。良好的心理素質(zhì)就是要勇于面對工作生活中的挫折，在繁忙工作中，有條不紊，冷靜沉著的處理有關(guān)事務(wù)。人員素質(zhì)問題是影響檢驗結(jié)果的首要因素。
四、標本處理因素：
實驗室人員收到標本后應(yīng)認真查對，對不符合要求的標本和申請單要拘收，合格標本要及時分離血清，避免溶血，提取血清時不應(yīng)混有大量纖維蛋白或細胞成分。對不能及時檢測的標本要妥善保存于4℃冰箱，做好原始記錄，標本管上最好標上待檢者姓名、日期。從冰箱取出的標本要預(yù)溫至室溫，對冰凍的樣品要融化好，并充分混勻再用。
五、操作過程的影響因素：
1、操作前應(yīng)對實驗的物理參數(shù)有充分的了解，如環(huán)境溫度(保持在18 C～25℃)、反應(yīng)孵育溫度和孵育時間、洗滌的次數(shù)等，要先查看水育箱溫度，是否符合要求。
2、正確使用加樣器加樣器應(yīng)垂直加入標本或試劑，避免刮擦包被板底部。加樣過程中避免液體外濺，血清殘留在反應(yīng)孔壁上，加樣器吸頭要清洗干凈，避免污染，加樣次序要與說明書一致，否則可導(dǎo)致結(jié)果錯誤，實驗重復(fù)性差。
3、手工洗板加洗液時沖擊力不要太大，洗滌次數(shù)不要超過說明書推薦的洗滌次數(shù)，洗液在反應(yīng)孔內(nèi)滯留的時間不宜太長。不要使洗液在孔間竄流，造成孔問污染，導(dǎo)致假陰性或假陽性。
4、要保證加液量一致 我們在使用時感覺滴瓶加液不如加樣器好，滴瓶不易控制加液量不準，造成顯色不統(tǒng)一，判斷錯誤。
5、顯色液量不可過多 加樣的工作環(huán)境不能處于陽光直射的環(huán)境下，加顯色系統(tǒng)后要避光反應(yīng)，顯色液量不能過多，以免顯色過強。
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