1、ELISA技術(shù)原理

將抗原抗體的特異性免疫反應(yīng)與酶的催化反應(yīng)相結(jié)合的免疫檢測(cè)技術(shù)，利用酶標(biāo)技術(shù)標(biāo)記抗原或抗體，通過(guò)顯色反應(yīng)，用以檢測(cè)相應(yīng)的抗體或抗原，對(duì)其進(jìn)行定性或定量分析。

① 將已知的抗原或抗體通過(guò)物理吸附于固相載體表面，并保持其免疫學(xué)活性；

② 利用酶標(biāo)技術(shù)使抗原或抗體與酶形成酶結(jié)合物，并保持酶標(biāo)抗原或抗體的免疫活性及酶的活性；

③ 酶結(jié)合物與相應(yīng)的抗原或抗體結(jié)合后，加入底物，底物被酶催化顯色，依據(jù)底物顏色反應(yīng)及深淺判斷待測(cè)物中相應(yīng)抗體或抗原的量。

2. 三種必要的試劑：

在這種測(cè)定方法中有3種必要的試劑：

① 固相的抗原或抗體（免疫吸附劑）

② 酶標(biāo)記的抗原或抗體（標(biāo)記物）

③ 酶作用的底物（顯色劑）

3. ELISA四種常用的方法

ELISA可用于測(cè)定抗體,也可用于檢測(cè)抗原。根據(jù)檢測(cè)目的和操作步驟不同,有四種類(lèi)型的常用方法：間接法、雙抗體夾心法、雙抗原夾心法、競(jìng)爭(zhēng)法。

3.1、間接法（此法是測(cè)定抗體經(jīng)常用的方法）

將已知抗原吸附于固相載體,加入待檢標(biāo)本(含相應(yīng)抗體)與之結(jié)合。洗滌后,加入酶標(biāo)抗球蛋白抗體(酶標(biāo)抗抗體)和底物進(jìn)行測(cè)定。

3.2、雙抗體夾心法（此法常用于測(cè)定抗原）

將已知抗體吸附于固相載體、加入待檢標(biāo)本(含相應(yīng)抗原)與之結(jié)合。溫育后洗滌,加入酶標(biāo)抗體和底物進(jìn)行測(cè)定。

3.3、雙抗原夾心法（此法多用于乙肝抗體檢測(cè)）

將已知抗原吸附于固相載體、加入待檢標(biāo)本(含相應(yīng)抗體)與之結(jié)合。溫育后洗滌,加入酶標(biāo)抗原和底物進(jìn)行測(cè)定。

3.4、競(jìng)爭(zhēng)法（此法可用于抗原和半抗原的定量測(cè)定，也可用于測(cè)定抗體）

以測(cè)定抗原為例，將持異性抗體吸附于固相載體;加入待測(cè)抗原和一定量的酶標(biāo)已知抗原,使二者競(jìng)爭(zhēng)與固相抗體結(jié)合;經(jīng)過(guò)洗滌分離,最后結(jié)合于固相的酶標(biāo)抗原與待測(cè)抗原含量呈負(fù)相關(guān)。

4.ELISA四種檢測(cè)方法的比較