操作步驟：

1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2. 設置標準品孔、樣本孔和空白孔，空白孔什么都不加；標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；

3. 待測樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；

4. 隨后標準品孔和樣本孔中（空白孔不加）加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6. 所有孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7. 所有孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。

注意事項：

1.試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。

2.實驗中不用的試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。

3.實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。

4.不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。 

5.使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。

6.使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

7.洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。

8.底物A應揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。

9.加入試劑的順序應*，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。

10.按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。