ATCC細(xì)胞原理

在不加任何條件下直接凍存細(xì)胞時(shí)，細(xì)胞內(nèi)和外環(huán)境中的水都會(huì)形成冰晶，能導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)發(fā)生機(jī)械損傷、電解質(zhì)升高、滲透壓改變、脫水、PH改變、蛋白變性等，能引起細(xì)胞死亡。如向培養(yǎng)液加入保護(hù)劑，可使冰點(diǎn)降低。在緩慢的凍結(jié)條件下，能使細(xì)胞內(nèi)水份在凍結(jié)前透出細(xì)胞。貯存在－130℃以下的低溫中能減少冰晶的形成。
細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)速度要快，使之迅速通過細(xì)胞zui易受損的－5～0℃，細(xì)胞仍能生長(zhǎng)，活力受損不大
目前常用的保護(hù)劑為二甲亞砜（DMSO）和甘油，它們對(duì)細(xì)胞無毒性，分子量小，溶解度大，易穿透細(xì)胞。

ATCC細(xì)胞注意事項(xiàng)：

      【材料】

1.  常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)儀器設(shè)備 恒溫水浴振蕩器。

2.  培養(yǎng)液（DMEM）胎牛血清（CBS）二甲基亞砜（DMSO）

ATCC細(xì)胞【操作程序】

1.  細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行常規(guī)消毒，紫外照射40min以上。

2.  培養(yǎng)液（DMEM）、0.25％胰蛋白酶（Trypsin）恒溫水浴箱370C預(yù)熱20min，備用。

3.  二甲基亞砜（DMSO）在40C冰箱中冷藏30min，備用。

4.  從液氮保存罐中取出凍存管，立即放入400C水浴中，快速搖晃，直至凍存液*融化。

5.  將細(xì)胞懸液移入15ml離心管，緩慢加入4ml培養(yǎng)液，離心（1000r/min，5min）。

6.  用培養(yǎng)液懸液混懸沉淀細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度，方培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

7.  記錄復(fù)蘇日期。