ATCC細胞原理

在不加任何條件下直接凍存細胞時，細胞內(nèi)和外環(huán)境中的水都會形成冰晶，能導(dǎo)致細胞內(nèi)發(fā)生機械損傷、電解質(zhì)升高、滲透壓改變、脫水、PH改變、蛋白變性等，能引起細胞死亡。如向培養(yǎng)液加入保護劑，可使冰點降低。在緩慢的凍結(jié)條件下，能使細胞內(nèi)水份在凍結(jié)前透出細胞。貯存在－130℃以下的低溫中能減少冰晶的形成。
細胞復(fù)蘇時速度要快，使之迅速通過細胞zui易受損的－5～0℃，細胞仍能生長，活力受損不大
目前常用的保護劑為二甲亞砜（DMSO）和甘油，它們對細胞無毒性，分子量小，溶解度大，易穿透細胞。

ATCC細胞注意事項：

      【材料】

1.  常規(guī)細胞培養(yǎng)儀器設(shè)備 恒溫水浴振蕩器。

2.  培養(yǎng)液（DMEM）胎牛血清（CBS）二甲基亞砜（DMSO）

ATCC細胞【操作程序】

1.  細胞實驗室進行常規(guī)消毒，紫外照射40min以上。

2.  培養(yǎng)液（DMEM）、0.25％胰蛋白酶（Trypsin）恒溫水浴箱370C預(yù)熱20min，備用。

3.  二甲基亞砜（DMSO）在40C冰箱中冷藏30min，備用。

4.  從液氮保存罐中取出凍存管，立即放入400C水浴中，快速搖晃，直至凍存液*融化。

5.  將細胞懸液移入15ml離心管，緩慢加入4ml培養(yǎng)液，離心（1000r/min，5min）。

6.  用培養(yǎng)液懸液混懸沉淀細胞，調(diào)整細胞濃度，方培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

7.  記錄復(fù)蘇日期。