當(dāng)前位置:上海撫生實業(yè)有限公司>>技術(shù)文章>>載脂蛋白ELISA檢測試劑盒注意事項與標(biāo)本處理方法
標(biāo)本處理:
1、某些天然蛋白或重組蛋白,包括原核及真核重組蛋白,可能因為與本產(chǎn)品所使用的檢測抗體及捕獲抗體不匹配,而不被檢測出。
2、建議使用新鮮樣本,保存時間過長可能會存在蛋白降解或變性導(dǎo)致實驗結(jié)果偏差。
3、若所檢樣本不包含在說明書所列樣本之中,建議進(jìn)行預(yù)實驗驗證其有效性,并注意留存樣本。
4、使用化學(xué)裂解液制備的組織勻漿或細(xì)胞提取液可能會由于某些化學(xué)物質(zhì)的引入導(dǎo)致載脂蛋白ELISA檢測試劑盒實驗結(jié)果偏差。
5、實驗前應(yīng)預(yù)測標(biāo)本含量,如果標(biāo)本濃度過高,應(yīng)對標(biāo)本進(jìn)行稀釋,使稀釋后的標(biāo)本符合試劑盒的檢測范圍,計算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。標(biāo)本使用0.01mol/L的PBS稀釋(PH=7.0-7.2)。
6、若樣本為細(xì)胞培養(yǎng)上清,因該類樣本干擾因素較多,如:細(xì)胞狀態(tài)、細(xì)胞數(shù)量、采樣時間等,所以可能存在檢測不出的情況。
7、本公司只對載脂蛋白ELISA檢測試劑盒本身負(fù)責(zé),不對因使用該載脂蛋白ELISA檢測試劑盒所造成的樣本消耗負(fù)責(zé),請使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量,預(yù)留充足的樣本
實驗條件如下:
1、固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維 素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。
2、包被抗體或抗原的選擇:將抗體或抗原吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一 般要求PH在9.0~9.6之間。
3、 酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇:先用直接載脂蛋白ELISA檢測試劑盒進(jìn)行初步效價的滴定。然后再固定其 它條件或采取“方陣法",在正式實驗系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。
4、酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng),而本身無色。有些供氫體有潛在的致癌作用,載脂蛋白ELISA檢測試劑盒應(yīng)注意防護(hù)。
注意事項:
1、 從2-8℃取出的試劑盒,在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2、嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗結(jié)果載脂蛋白ELISA檢測試劑盒判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
3、為避免交叉污染,要避免重復(fù)使用手中的吸頭和封板膜。
4、不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
5、底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。
6、所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按生物廢棄物處理。終止液為2M硫酸,使用時必須注意安全。
7、各步驟加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校準(zhǔn)其準(zhǔn)確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
8、每次試驗測定載脂蛋白ELISA檢測試劑盒的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔zui高濃度的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n)。
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