實(shí)時(shí)熒光定量載脂蛋白ELISA檢測(cè)試劑盒微量感染因子時(shí)，容易因?yàn)槲廴镜亩鴮?dǎo)致各種問題，因此，進(jìn)

行載脂蛋白ELISA檢測(cè)試劑盒。

操作人員應(yīng)該嚴(yán)格遵守一些操作規(guī)程，zui大程度地降低可能出現(xiàn)的載脂蛋白ELISA檢測(cè)試劑盒污染或

杜絕污染的出現(xiàn)。

（1）劃分操作區(qū)：目前，普通載脂蛋白ELISA檢測(cè)試劑盒尚不能做到單人單管，實(shí)現(xiàn)*閉管操作，但無論是否能夠達(dá)到單人單管，均要求實(shí)驗(yàn)操作在三個(gè)不同的區(qū)域內(nèi)進(jìn)行，載脂蛋白ELISA檢測(cè)試劑盒

的前處理和后處理要在不同的隔離區(qū)內(nèi)進(jìn)行：

① 標(biāo)本處理區(qū)，包括擴(kuò)增摸板的制備；

② 載脂蛋白ELISA檢測(cè)試劑盒擴(kuò)增區(qū)，包括反應(yīng)液的配制和載脂蛋白ELISA檢測(cè)試劑盒擴(kuò)增；

③ 產(chǎn)物分析區(qū)，凝膠電泳分析，產(chǎn)物拍照及重組克隆的制備。

各工作區(qū)要有一定的隔離，操作器材，要有一定的方向性。如：標(biāo)本制備→載脂蛋白ELISA檢測(cè)試劑盒擴(kuò)增→產(chǎn)物分析→產(chǎn)物處理。

切記：產(chǎn)物分析區(qū)的產(chǎn)物及器材不要拿到其他兩個(gè)工作區(qū)。

  （2）分裝試劑：載脂蛋白ELISA檢測(cè)試劑盒擴(kuò)增所需要的試劑均應(yīng)在裝有紫外燈的超凈工作臺(tái)或負(fù)壓工作臺(tái)配制和分裝。

所有的加樣器和吸頭需固定放于其中，不能用來吸取擴(kuò)增后的DNA和其他來源的DNA：

① 載脂蛋白ELISA檢測(cè)試劑盒用水應(yīng)為高壓的雙蒸水；

② 引物和dNTP用高壓的雙蒸水在無載脂蛋白ELISA檢測(cè)試劑盒擴(kuò)增產(chǎn)物區(qū)配制；

③ 引物和dNTP應(yīng)分裝儲(chǔ)存，分裝時(shí)應(yīng)標(biāo)明時(shí)間，以備發(fā)生污染時(shí)查找原因。

(3) 實(shí)驗(yàn)操作注意事項(xiàng) 盡管擴(kuò)增序列的殘留污染大部分是假陽性反應(yīng)的原因，樣品間的交叉污染也是

原因之一。因此，不僅要在進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)是謹(jǐn)慎認(rèn)真，在樣品的收集、抽提和擴(kuò)增的所有環(huán)節(jié)都應(yīng)該

注意：

① 戴一次性手套，若不小心濺上反應(yīng)液，立即更換手套；
 

② 使用一次性吸頭，嚴(yán)禁與PCR產(chǎn)物分析室的吸頭混用，吸頭不要長(zhǎng)時(shí)間暴露于空氣中，避免氣溶膠的污染；
 

③ 避免反應(yīng)液飛濺，打開反應(yīng)管時(shí)為避免此種情況，開蓋前稍離心收集液體于管底。若不小心濺到手套或桌面上，應(yīng)立刻更換手套并用稀酸擦拭桌面；
 

④ 操作多份樣品時(shí)，制備反應(yīng)混合液，先將dNTP、緩沖液、引物和酶混合好，然后分裝，這樣即可以減少操作，避免污染，又可以增加反應(yīng)的度；
 

⑤ zui后加入反應(yīng)模板，加入后蓋緊反應(yīng)管；