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小鼠ELISA試劑盒實驗原理:
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠血糖水平。用純化的小鼠血糖抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入血糖,再與 HRP標記的血糖抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的血糖呈正相關。用酶標儀在 450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中小鼠血糖濃度。
1. 血清:室溫血液自然凝固 10-20分鐘,離心 20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應再次離心。
2. 血漿:應根據標本的要求選擇 EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合 10-20 分鐘后,離心20 分鐘左右(2000-3000 轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。
3. 尿液:用無菌管收集,離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4. 細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心 20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,用 PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到 100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心 20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
5. 組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的 PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保? 2-8℃的溫度。加入一定量的 PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心 20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
6.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融.
7.不能檢測含NaN3的樣品,因 NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
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