中國藥典（2020年版）第一增補版解決方案-氨基酸分析篇

時間：2026/1/30

氨基酸是人體蛋白質的基本組成物質，除個別芳香族氨基酸外，紫外吸收均較弱，直接使用紫外檢測器檢測靈敏度低。故氨基酸分析通常需要選擇合適的衍生試劑增加氨基酸的生色團，再使用紫外檢測器進行檢測。目前氨基酸衍生主要包括柱前和柱后衍生兩種方法。

柱前衍生化的高效液相色譜法以其操作簡單、分析速度快、靈敏度高等優(yōu)點，成為藥典中氨基酸的主要分析方法。常見的柱前衍生試劑有異硫氰酸苯酯（PITC）、6-氨基喹啉-N-(羥基琥珀酰亞氨基)氨基甲酸酯（AQC）、鄰苯二醛（OPA）、9-Fmoc-Cl 和2,4-二硝基氟苯（DNFB）等。柱前PITC衍生氨基酸測定法分離效果好，方法技術成熟，適用于含氨基酸種類較多的樣品分析。

本方案使用 Leaps超高效液相色譜系統(tǒng)，采用柱前PITC衍生氨基酸測定法對氨基酸注射液以及氨基酸加鋅口服液進行分析，測定結果和產品標示值一致，方法穩(wěn)定可靠。

儀器配置

儀器

Leaps超高效液相色譜系統(tǒng)

Leaps四元泵（P40）

Leaps標準型自動進樣器（A10）

Leaps 標準加熱型柱溫箱（C10）

Leaps紫外-可見檢測器（D10）

色譜條件

Chromai Lotus C18（4.6*250 mm, 5 μm）(貨號：3.1.04.0009)

流動相A：乙腈-0.1 mol/L醋酸鈉溶液（取醋酸鈉13.6 g，加水900 mL溶解，用醋酸調pH至6.5，加水至1000 mL）（7:93）

流動相B：乙腈-水（80:20）

檢測波長：254 nm；

柱溫：40 ℃；

流速：1 mL/min；

梯度洗脫：

時間（min）	流動相A（%）	流動相B（%）
0	100	0
14	85	15
29	66	34
30	0	100
37	0	100
37.1	100	0
45	100	0

實驗結果和討論

標準溶液色譜圖

PITC衍生氨基酸標準溶液譜圖，如圖1所示

圖1 氨基酸標準溶液色譜圖

線性范圍及重復性結果

將不同濃度的系列標準工作溶液分別進樣，得到并繪制標準曲線，在線性范圍內，線性相關系數(shù)均大于0.999，且6針標準溶液保留時間和峰面積的重復性結果良好。

表1 線性范圍及重復性結果

化合物名稱	線性范圍μg/mL	R^2	重復性
化合物名稱	線性范圍μg/mL	R^2	保留時間RSD%	峰面積RSD%
天冬氨酸	7.14~35.71	0.9994	0.089	0.337
谷氨酸	4.62~23.10	0.9997	0.084	0.336
絲氨酸	3.45~17.26	0.9999	0.099	0.163
甘氨酸	7.04~35.18	0.9999	0.095	0.204
組氨酸	5.62~28.10	0.9999	0.082	0.253
精氨酸	6.90~34.52	0.9998	0.063	0.265
蘇氨酸	8.00~40.00	0.9998	0.045	0.245
丙氨酸	11.37~56.85	0.9998	0.046	0.256
脯氨酸	5.12~25.60	0.9998	0.023	0.382
絡氨酸	2.96~14.82	0.9999	0.046	0.262
纈氨酸	6.12~30.60	0.9998	0.013	0.379
蛋氨酸	2.83~14.17	0.9999	0.023	0.280
異亮氨酸	3.19~15.95	0.9999	0.012	0.226
亮氨酸	11.90~59.52	0.9999	0.009	0.217
苯丙氨酸	5.95~29.76	0.9999	0.025	0.151
賴氨酸	14.86~74.29	0.9999	0.023	0.150

樣品測試結果

對氨基酸注射液和氨基酸加鋅口服液同樣采用柱前PITC衍生法進行氨基酸測定，得到樣品譜圖如圖2和圖3所示，氨基酸測定結果與產品標示值一致。連續(xù)進樣六針樣品溶液，各氨基酸濃度結果RSD%均小于1%，方法穩(wěn)定可靠。

圖2 氨基酸注射液測試譜圖

圖3 氨基酸加鋅口服液測試譜圖

總結

采用 Leaps 超高效液相色譜系統(tǒng)，搭配紫外檢測器，采用柱前PITC衍生氨基酸測定法，16種氨基酸在線性范圍內，線性相關系數(shù)均大于0.999。并對氨基酸注射液以及氨基酸加鋅口服液進行分析，測定結果和產品標示值一致，且六針樣品重現(xiàn)性測試中各氨基酸濃度結果RSD%均小于1%，方法穩(wěn)定可靠。

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