科研白細胞介素6(IL-6)ELISA試劑盒操作步驟

　　結(jié)合科研用細胞因子ELISA檢測相關信息，以下是科研用白細胞介素6(IL-6)ELISA試劑盒的標準操作步驟：

　　倉鼠白細胞介素6(IL-6)ELISA試劑盒 96T/48T

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　　小鼠白細胞介素6(IL-6)ELISA試劑盒 96T/48T

　　一、實驗前準備

　　提前1小時將試劑盒和待測樣本從冰箱取出，室溫平衡至25-28℃，避免低溫影響反應活性。

　　按說明書將20×濃縮洗滌液用蒸餾水按1:20比例稀釋，若濃縮液有結(jié)晶，室溫溶解后再稀釋使用。

　　提前準備好450nm酶標儀、不同量程高精度移液器、37℃恒溫箱等器材。

　　二、正式操作流程

　　板條準備?：計算所需微孔板條數(shù)，取出后剩余板條密封放回4℃保存，設置標準品孔、樣本孔和空白孔。

　　加樣?：標準品孔加入不同濃度的標準品50μL，樣本孔先加40μL樣本稀釋液，再加10μL待測樣本，空白孔加50μL樣本稀釋液。

　　加酶孵育?：每孔加入HRP標記的檢測抗體100μL，封板膜密封后，37℃恒溫箱溫育60分鐘。

　　洗板?：棄去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后甩干，重復洗板5次，最后在吸水紙上充分拍干。

　　顯色?：每孔依次加入底物A、底物B各50μL，輕輕混勻后37℃避光孵育15分鐘。

　　終止與讀數(shù)?：每孔加入50μL終止液，待藍色轉(zhuǎn)為黃色后，15分鐘內(nèi)用酶標儀在450nm波長下測定各孔OD值。

　　三、結(jié)果計算

　　以標準品濃度為橫坐標、對應OD值為縱坐標繪制標準曲線，通過樣本的OD值在曲線上查出對應濃度，再乘以樣本的稀釋倍數(shù)，即可得到IL-6的實際濃度。

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