ELISA實驗中常見的基質(zhì)效應(yīng)有哪些

　　ELISA實驗中的基質(zhì)效應(yīng)，是指樣本中除目標(biāo)分析物外的其他組分干擾抗原-抗體結(jié)合，導(dǎo)致檢測信號偏離真實值的現(xiàn)象，常見類型及成因如下：

　　一、非特異性競爭結(jié)合型

　　基質(zhì)中的部分蛋白、小分子物質(zhì)會直接搶占抗體的抗原結(jié)合位點，或與目標(biāo)分析物競爭有限的抗體結(jié)合位置，直接阻礙抗原抗體的特異性結(jié)合，最終導(dǎo)致檢測結(jié)果被低估，常見于血清、血漿樣本中。

　　二、酶活性干擾型

　　樣本中的溶血釋放的血紅蛋白、部分代謝產(chǎn)物(如膽紅素)會直接抑制ELISA體系中辣根過氧化物酶(HRP)等標(biāo)記酶的活性，阻斷底物顯色反應(yīng)，造成顯色信號偏弱，OD值遠低于預(yù)期。

　　三、理化環(huán)境干擾型

　　樣本的離子強度、pH值、黏度等理化參數(shù)與試劑盒預(yù)設(shè)的緩沖體系差異過大，會改變抗體的空間構(gòu)象、影響分析物的活度系數(shù)，破壞免疫反應(yīng)的優(yōu)條件，進而干擾檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。

　　四、異嗜性抗體/內(nèi)源性抗體干擾型

　　血清等樣本中存在的人抗小鼠抗體(HAMA)等異嗜性抗體，會直接橋連捕獲抗體和檢測抗體，無需目標(biāo)分析物即可觸發(fā)信號，引發(fā)非特異性的假陽性結(jié)果，是臨床樣本中十分常見的干擾類型。

　　五、基質(zhì)成分交叉反應(yīng)型

　　樣本中存在與目標(biāo)分析物結(jié)構(gòu)高度相似的同源物質(zhì)，會被抗體非特異性識別結(jié)合，導(dǎo)致檢測結(jié)果出現(xiàn)假偏高，無法區(qū)分真實目標(biāo)物和類似干擾物。

　　六、校準(zhǔn)品基質(zhì)不匹配型

　　試劑盒開發(fā)階段使用純緩沖液作為標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，和真實生物樣本(血清、組織勻漿等)的蛋白豐度、組分復(fù)雜度差異極大，當(dāng)檢測真實樣本時，樣本基質(zhì)會削弱抗原抗體結(jié)合，甚至出現(xiàn)大量樣本的檢測值低于空白值的反?，F(xiàn)象。

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