ELISA液體樣本處理方法及收集注意事項(xiàng)

　　一、通用基礎(chǔ)處理流程

　　所有ELISA液體樣本都需用無(wú)菌管收集，在2~8℃條件下以2000~3000轉(zhuǎn)/分離心20分鐘左右，去除沉淀和懸浮物，收集上層澄清上清液即可用于后續(xù)檢測(cè)，若存放過(guò)程中出現(xiàn)沉淀，使用前需再次離心處理。

　　二、不同類(lèi)型液體樣本的專(zhuān)屬處理方法

　　血清樣本?

　　用無(wú)抗凝劑的無(wú)菌試管采集新鮮血液，室溫靜置10~30分鐘讓血液自然凝固，再按通用流程離心取上清，避免劇烈搖晃引發(fā)溶血。

　　血漿樣本?

　　根據(jù)檢測(cè)需求提前選擇EDTA、肝素鈉或檸檬酸鈉作為抗凝劑，采血后立即輕柔顛倒混勻10~20分鐘，再按通用流程離心取上清，注意不要觸碰中間層的白細(xì)胞和血小板。

　　尿液、唾液、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等樣本?

　　直接用無(wú)菌管收集樣本，按通用流程完成離心取上清即可，細(xì)胞培養(yǎng)上清需額外注意提前去除殘留的細(xì)胞碎片。

　　三、收集與保存注意事項(xiàng)

　　嚴(yán)禁使用含有?NaN??的樣本，它會(huì)抑制體系中HRP酶的活性，直接導(dǎo)致檢測(cè)出現(xiàn)假陰性結(jié)果。

　　樣本采集后建議盡快完成檢測(cè)，若無(wú)法當(dāng)天檢測(cè)，需按單次使用量分裝后置于-20℃或-80℃環(huán)境凍存，嚴(yán)格避免反復(fù)凍融，防止目標(biāo)蛋白降解失活。

　　全程避免樣本發(fā)生溶血，紅細(xì)胞破裂釋放的過(guò)氧化物酶類(lèi)物質(zhì)會(huì)引發(fā)非特異性顯色，造成假陽(yáng)性，同時(shí)也要防止細(xì)菌污染，避免引入內(nèi)源性干擾物。

　　部分特殊樣本(如牛奶、蜂蜜)需提前參考對(duì)應(yīng)文獻(xiàn)做預(yù)前處理，再按通用流程完成離心操作。

　　步驟流程：

　　標(biāo)準(zhǔn)品和樣本的添加

　　加入檢測(cè)抗體

　　封板和孵育

　　洗滌

　　加入底物B

　　避光孵育

　　加入終止液

　　數(shù)據(jù)檢測(cè)

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