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ELISA液體樣本處理方法及收集注意事項(xiàng)
一、通用基礎(chǔ)處理流程
所有ELISA液體樣本都需用無(wú)菌管收集,在2~8℃條件下以2000~3000轉(zhuǎn)/分離心20分鐘左右,去除沉淀和懸浮物,收集上層澄清上清液即可用于后續(xù)檢測(cè),若存放過(guò)程中出現(xiàn)沉淀,使用前需再次離心處理。
二、不同類(lèi)型液體樣本的專(zhuān)屬處理方法
血清樣本?
用無(wú)抗凝劑的無(wú)菌試管采集新鮮血液,室溫靜置10~30分鐘讓血液自然凝固,再按通用流程離心取上清,避免劇烈搖晃引發(fā)溶血。
血漿樣本?
根據(jù)檢測(cè)需求提前選擇EDTA、肝素鈉或檸檬酸鈉作為抗凝劑,采血后立即輕柔顛倒混勻10~20分鐘,再按通用流程離心取上清,注意不要觸碰中間層的白細(xì)胞和血小板。
尿液、唾液、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等樣本?
直接用無(wú)菌管收集樣本,按通用流程完成離心取上清即可,細(xì)胞培養(yǎng)上清需額外注意提前去除殘留的細(xì)胞碎片。
三、收集與保存注意事項(xiàng)
嚴(yán)禁使用含有?NaN??的樣本,它會(huì)抑制體系中HRP酶的活性,直接導(dǎo)致檢測(cè)出現(xiàn)假陰性結(jié)果。
樣本采集后建議盡快完成檢測(cè),若無(wú)法當(dāng)天檢測(cè),需按單次使用量分裝后置于-20℃或-80℃環(huán)境凍存,嚴(yán)格避免反復(fù)凍融,防止目標(biāo)蛋白降解失活。
全程避免樣本發(fā)生溶血,紅細(xì)胞破裂釋放的過(guò)氧化物酶類(lèi)物質(zhì)會(huì)引發(fā)非特異性顯色,造成假陽(yáng)性,同時(shí)也要防止細(xì)菌污染,避免引入內(nèi)源性干擾物。
部分特殊樣本(如牛奶、蜂蜜)需提前參考對(duì)應(yīng)文獻(xiàn)做預(yù)前處理,再按通用流程完成離心操作。
步驟流程:
標(biāo)準(zhǔn)品和樣本的添加
加入檢測(cè)抗體
封板和孵育
洗滌
加入底物B
避光孵育
加入終止液
數(shù)據(jù)檢測(cè)
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