隨著新春的假期漸漸遠(yuǎn)去，我們正式迎來龍年工作日程。在這開年之際，愿所有的努力和汗水都能換來滿滿的收獲，今天我們就來一起迎接 CHO 細(xì)胞培養(yǎng)規(guī)模放大的挑戰(zhàn)，探索培養(yǎng)奧秘。
CHO 細(xì)胞，以其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，在生物制藥領(lǐng)域中扮演著*的角色。因其能夠快速、高水平地表達(dá)多種重組蛋白，使用懸浮培養(yǎng)工藝易于放大培養(yǎng)，CHO 細(xì)胞在生物制藥領(lǐng)域中被廣泛應(yīng)用于生產(chǎn)治療型蛋白。但由于規(guī)模放大過程中各參數(shù)間的調(diào)整過于復(fù)雜，細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)的放大仍然是一門通常依靠反復(fù)試驗(yàn)來確定最佳工藝參數(shù)和操作策略的藝術(shù)。
關(guān)鍵工藝條件
通氣
在哺乳動(dòng)物細(xì)胞生物反應(yīng)器中，通氣是一個(gè)關(guān)鍵組成部分，特別是在高細(xì)胞密度下操作時(shí)，因?yàn)樾枰蚣?xì)胞提供足夠的氧氣，同時(shí)必須去除二氧化碳，以防止其在培養(yǎng)液中積累。
圖 / 哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)中的常見通氣策略
氧氣
在 CHO 細(xì)胞培養(yǎng)中，溶氧水平通常保持在空氣飽和度的 10% 到 80% 之間。過高的氧濃度會(huì)導(dǎo)致活性氧 (ROS) 的積累，這會(huì)導(dǎo)致線粒體呼吸鏈和細(xì)胞內(nèi)氧化還原的改變，最終導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)抑制和特異性生產(chǎn)力下降。另一方面，低氧條件也會(huì)誘導(dǎo) ROS 積累。
氧氣傳質(zhì)系數(shù) (kLa) 用于衡量系統(tǒng)的氧氣傳輸能力。kLa 主要與單位體積功率輸入 (P/V) 和表觀氣體速度 (vs) 相關(guān)，其中 K 是常數(shù)，指數(shù) α 和 β 分別約為 0.4 和 0.5，氣泡大小、混合速度、氣體流速、體積和生物反應(yīng)器幾何形狀等工藝參數(shù)都會(huì)影響 kLa。
二氧化碳
在哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)中，溶解的二氧化碳 (pCO2) 水平通常保持在 4%-10% 的CO2飽和度 (30-70 mmHg)。高濃度的溶解 CO2 (150–200 mmHg) 會(huì)對(duì)多種哺乳動(dòng)物細(xì)胞的細(xì)胞生長(zhǎng)和生產(chǎn)力產(chǎn)生不利影響。在 CHO 細(xì)胞培養(yǎng)中，高 pCO2 水平可抑制細(xì)胞生長(zhǎng)、細(xì)胞生產(chǎn)力并改變產(chǎn)品質(zhì)量。
CHO-K1Q 細(xì)胞株推薦培養(yǎng)參數(shù)
• 復(fù)蘇時(shí)按 5*10^5 cells/ml 密度接種更利于細(xì)胞恢復(fù)；
• 傳代時(shí)細(xì)胞密度應(yīng)控制在1.8-2.5x10^6 cells/m，避免高密度培養(yǎng)(> 3x10^6 cells/ml) 影響后續(xù)轉(zhuǎn)染效果；
• 傳代培養(yǎng)時(shí)需添加 4-8mM 谷氨酰胺培養(yǎng)；
• 培養(yǎng)條件：37℃，5%CO2, 26mm 125rpm 或 50mm 90 rpm 如搖床振幅不同，可按公式換算：離心力(FC)=轉(zhuǎn)速的平方(rpm2)x 振幅(φ)。
CHO-K1Q 培養(yǎng)雙姝
超人氣培養(yǎng)基 QuaCell® CellBest
QuaCell® CellBest Basal Medium & 007 Feed Medium 組合是樂純生物集團(tuán)旗下康晟生物研發(fā)團(tuán)隊(duì)通過 DoE 等統(tǒng)計(jì)學(xué)分析軟件，從培養(yǎng)基配方優(yōu)化、培養(yǎng)基配制、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、細(xì)胞株適配性、產(chǎn)量及質(zhì)量參數(shù)等方面進(jìn)行測(cè)試和評(píng)估，推出的無血清，無動(dòng)物源成分，化學(xué)成分限定的培養(yǎng)基和補(bǔ)料。
CHO 培養(yǎng)基新秀 QuaCell® CHO LeAd
QuaCell® CHO LeAd Medium 可為中國(guó)倉鼠卵巢細(xì)胞(CHO 細(xì)胞)的高密度增殖提供豐富的營(yíng)養(yǎng)成分。此產(chǎn)品是一款無血清、無動(dòng)物成分的化學(xué)限定培養(yǎng)基，適用于懸浮培養(yǎng) CHO 細(xì)胞以表達(dá)抗體及蛋白產(chǎn)物。此培養(yǎng)基配方中不含次黃嘌呤、胸苷及 L-谷氨酰胺，適合二氫葉酸還原酶、谷氨酰胺合成酶(GS)篩選系統(tǒng)。
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