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純化小技巧| 離子交換層析介質(zhì)的應(yīng)用

發(fā)布時間：2023-8-17
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　　在生物大分子的提純中，最不可或缺的步驟之一就是離子交換層析了，其通常應(yīng)用在目標(biāo)產(chǎn)物的精純階段。當(dāng)然，針對部分蛋白，該方法也適用于純化工藝的前期或后期，以達(dá)到更好的分離效果。

　　離子交換層析是指在一定pH條件下，依據(jù)目標(biāo)產(chǎn)物與雜質(zhì)所帶電荷差異而分離的純化方式。根據(jù)交換離子的不同可將離子交換層析介質(zhì)分為陰離子交換層析介質(zhì)和陽離子交換層析介質(zhì)兩大類。官能團(tuán)主要包括Q、DEAE、S、SP、CM。

　　百林科主要提供瓊脂糖、葡聚糖和聚合物基架的離子交換層析介質(zhì)，平均粒徑有34μm 、40μm、90μm、200μm。

離子交換層析過程可選用兩種模式

　　1　　流穿模式

　　目標(biāo)產(chǎn)物與填料不結(jié)合，而盡量將雜質(zhì)結(jié)合在層析填料上。例如對于等電點(diǎn)低于目標(biāo)產(chǎn)物等電點(diǎn)的雜質(zhì)，可選用陰離子層析-流穿模式進(jìn)行純化，調(diào)節(jié)緩沖體系pH高于雜質(zhì)等電點(diǎn)，低于目標(biāo)產(chǎn)物等電點(diǎn)。此時目標(biāo)產(chǎn)物會帶上正電，通過收集流穿液來進(jìn)行純化，而雜質(zhì)在該條件下則會帶上負(fù)電并與陰離子填料結(jié)合，通過再生模式進(jìn)行去除。

　　2　　結(jié)合洗脫模式　　

　　目標(biāo)產(chǎn)物與填料結(jié)合，再使用一定濃度的鹽進(jìn)行洗脫。例如對于等電點(diǎn)高于目標(biāo)產(chǎn)物等電點(diǎn)的雜質(zhì)，通?？刹捎藐栯x子-結(jié)合洗脫的層析模式進(jìn)行純化。通常采用鹽濃度梯度洗脫的方式實(shí)現(xiàn)對目標(biāo)產(chǎn)物和雜質(zhì)的分離。
離子交換層析示意圖

應(yīng)用案例

　　SP Chromstar FF去除VZV樣品中HCP雜質(zhì)(流穿模式)
層析圖譜

　　? 填料：SP Chromstar FF

　　? 層析柱：直徑為2.6 cm，高度10 cm

　　? 樣品：VZV樣品(疏水層析后)

　　? 溶液A：20mM PB，pH5.8

　　? 溶液B：20mM PB，1M NaCl，pH5.8

　　? 流速：60cm/h

　　? 層析：流穿模式(收集樣品)

HCP檢測結(jié)果

樣品 HCP

疏水層析后樣品 0.39%

純化后樣品 0.03%

　　
　　小結(jié)：使用百林科SP Chromstar FF 層析介質(zhì)，采用流穿模式，該樣品中HCP由0.39%降為0.03%，符合<0.05%的質(zhì)量要求。
歡迎掃碼申請，大量層析產(chǎn)品均可試用哦！

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