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純化小技巧 | 六邊形戰(zhàn)士羥基磷灰石-Nothing is Impossible

發(fā)布時間：2023-6-15

　　生物制藥純化工藝中，總會碰到性質(zhì)比較接近、較難分離的分子。如何選擇合適的填料應(yīng)用，已成為純化小伙伴的必備技能。百林科“六邊形戰(zhàn)士”羥基磷灰石填料，適用于不同純化應(yīng)用領(lǐng)域的各個階段，實現(xiàn)一切不可能。

　　羥基磷灰石[Ca10(PO4)6(OH)2]是一種無機純相層析介質(zhì)，高溫焙燒成球體，其晶體結(jié)構(gòu)與骨羥基磷灰石相同，且球體結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，粒徑均勻。

　　? 特殊的分離特性，可同時實現(xiàn)陽離子交換和鈣金屬親和兩種分離機制

　　? 增加使用壽命

　　? 高動態(tài)結(jié)合載量

　　? 良好的批次重復性


圖1：百林科羥基磷灰石電鏡圖

　　獨特的分離機制和選擇性，使羥基磷灰石成為下游工藝中不可或缺的層析介質(zhì)。本文將列舉羥基磷灰石純化不同生物分子的案例，可用于捕獲、中度純化或精純等不同階段，對宿主蛋白(HCP)、二聚體、宿主核酸(HCD)、rProtein A等呈現(xiàn)較好的去除效果。

　　CHT在純化應(yīng)用上的選擇

　　CHT多領(lǐng)域應(yīng)用案例介紹

　　1　　抗體應(yīng)用案例

　　? 樣品信息：雙抗陰離子流穿液

　　? 層析柱：10*250 mm，20 ml

　　? Buffer A: 5mM Na2SO4, 0.1M NaCl, pH 6.8

　　? Buffer B: 5mM Na2SO4, 1M NaCl, pH 6.8

圖2：BaronCHT type I ，40μm雙抗洗脫峰

表1：數(shù)據(jù)匯總

　　小結(jié)：BaronCHT 填料對于聚集體和HCP均有去除能力，且回收率滿足預期。

　　2　　重組因子類對照案例


圖3：百林科 II型洗脫圖譜	圖4：進口友商 II型洗脫圖譜

表2：數(shù)據(jù)匯總

　　小結(jié)：較進口友商同步對照，性能表現(xiàn)相當。

　　3　　mRNA應(yīng)用案例

推薦測試條件

　　? Column: CHT II型

　　? Buffer A：5mM PB，0.1M NaCl，2 mM CaCl2, pH 7.0

　　? Buffer B：500mM PB，0.1M NaCl，2 mM CaCl2 ，pH 7.0

　　? Eluction: 0~100%B 10CV

圖5¹：mRNA洗脫圖譜

　　小結(jié)：CHT可應(yīng)用于mRNA的捕獲，對于LC編碼的mRNA有較好的回收率和純度預期。

　　4　　AAV應(yīng)用案例

推薦測試條件

　　? Column: CHT I型

　　? Buffer A：5mM PB，0.15M NaCl，2 mM CaCl2, pH 7.2

　　? Buffer B：500mM PB，0.1M NaCl，2 mM CaCl2 ，pH 7.2

　　? Eluction: 0~100%B 10CV

圖6²：AAV應(yīng)用數(shù)據(jù)

　　小結(jié)：CHT I型填料在AAV載體有不錯應(yīng)用表現(xiàn)，Buffer條件中加入鈣離子可以有效提高AAV載體的回收率。

　　SUMMARY

　　盡管羥基磷灰石作為“六邊形戰(zhàn)士”功能很多，但是大家在使用過程中要注意緩沖液pH不能低于6.5，且溶液中不能含有檸檬酸或 EDTA組分，避免導致羥基磷灰石降解。近期，我們也會針對羥基磷灰石使用過程中的各類問題進行梳理解答，歡迎繼續(xù)關(guān)注百林科“純化小技巧”系列。

　　參考文獻：

　　1. Cui T, Fakhfakh K, Turney H, et al.Comprehensive studies on building a scalable downstream process for mRNAs to enable mRNA therapeutics. Biotechnol.Prog. 2023;39(1):e3301. doi:10.1002/btpr.3301

　　2. Mikako W , Naoya U, Guillermo P, et al. Large-scale puri?cation of functional AAV particles packaging the full genome using short-term ultracentrifugation with a zonal rotor. Gene Therapy.

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