純化小技巧 | 組氨酸（His）標(biāo)簽蛋白不掛柱怎么辦？

發(fā)布時(shí)間：2023-6-8

　　如果您采用真核表達(dá)系統(tǒng)，需要將發(fā)酵液直接上柱純化；亦或是樣品中含有EDTA等還原劑，該如何應(yīng)對(duì)？百林科全新一代親和填料Ni Chromstar Excel助您快速通關(guān)！這款產(chǎn)品耐受100mM EDTA，適用于真核分泌表達(dá)的His標(biāo)簽蛋白純化，眾多優(yōu)勢(shì)如虎添翼。

　　 關(guān)于His標(biāo)簽

　　His標(biāo)簽由多個(gè)組氨酸殘基構(gòu)成(6個(gè)最為常見)，由于組氨酸上的N原子能夠與某些過渡金屬離子形成配位鍵，利用這一特性，可以使用含有金屬離子配基的填料來捕獲和純化His標(biāo)簽重組蛋白。其特點(diǎn)如下：

　　?? 分子量小，基本不影響蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能。

　　?? 組氨酸的咪唑環(huán)結(jié)構(gòu)，可以結(jié)合二價(jià)金屬離子，咪唑和組氨酸標(biāo)簽競(jìng)爭(zhēng)性的結(jié)合在二價(jià)金屬離子上，加入高濃度的咪唑即可將組氨酸標(biāo)簽蛋白洗脫下來。

　　?? 具有成本低、易表達(dá)等特點(diǎn)，是目前最為常用的蛋白標(biāo)簽。

　　 鎳柱親和層析原理

　　通常大家所接觸的IDA、NTA和TED的不同螯合形式，就是基于鎳離子的不同螯合策略實(shí)現(xiàn)。鎳離子為六價(jià)，IDA偶聯(lián)需要占用其三個(gè)位點(diǎn)，還剩余三個(gè)位點(diǎn)結(jié)合His標(biāo)簽；第二種偶聯(lián)方式NTA則是占據(jù)鎳離子的四個(gè)位點(diǎn)，剩余兩個(gè)位點(diǎn)結(jié)合His標(biāo)簽；而第三種方式TED偶聯(lián)則需要占據(jù)五個(gè)位點(diǎn)，剩余1個(gè)位點(diǎn)結(jié)合His標(biāo)簽。

　　占據(jù)位點(diǎn)越多則鎳離子被抓的越“牢固”，載量會(huì)相應(yīng)的降低，若蛋白樣品中有高濃度的螯合劑如EDTA等，則需要選擇TED偶聯(lián)的鎳填料，減少鎳離子的脫落。


IDA	NTA	TED

　　百林科在標(biāo)簽蛋白純化領(lǐng)域擁有種類廣泛、質(zhì)量?jī)?yōu)異的Ni系列產(chǎn)品。今天，我們將為大家重點(diǎn)介紹百林科層析填料新品——Ni Chromstar Excel。

　　這是一款親和層析介質(zhì)，將過渡金屬離子 Ni2+ 預(yù)先螯合在以 TED為配基的 Chromstar 基架上制成。該層析介質(zhì)利用 Ni2+ 與蛋白質(zhì)上某些氨基酸(主要是組氨酸)的側(cè)鏈之間的相互作用，實(shí)現(xiàn)含有與不含有這些氨基酸、含有這些氨基酸數(shù)量多與少的蛋白質(zhì)的分離純化，具有明顯優(yōu)勢(shì)：

　　?? 耐受 100 mM EDTA

　　?? 應(yīng)用于分泌真核培養(yǎng)液上清中的組氨酸蛋白的捕獲或純化

　　?? >10 mg 組氨酸標(biāo)簽蛋白 /ml 層析介質(zhì)

　　?? 耐受堿洗，無需脫鎳掛鎳，有效避免交叉污染

　　?? 一步純度可達(dá)90%以上

　　?? 較好的批間一致性