1、應(yīng)用范圍
此酶免試劑盒可用于人血清和血漿中抗腺病毒IgM抗體的定性和定量檢測。
2、前言說明
腺病毒是人和動物體內(nèi)普遍存在的一種病原體，可分為許不同的血清型。腺病毒是一種常年存在所有人群中的地方性疾病。 這種傳染病可以通過空氣傳播，也可通過塵埃傳播。腺病毒主要感染呼吸道黏膜和腸道黏膜，也會感染角膜。它們主要集中于上皮細胞和局部附屬淋巴結(jié)。腺病毒可 引起各種已知的呼吸道病毒性疾?。汉粑兰膊?、肺炎、與游泳池相關(guān)的咽結(jié)膜炎高燒和角膜結(jié)膜炎流行病。腺病毒的腸內(nèi)感染主要出現(xiàn)在小于一歲的小孩中。它主 要特點是出現(xiàn)流行性急性腸胃炎，通常是由腺病毒40和41引起的。分離腺病毒或血清學(xué)檢測可以檢測是否急性腺病毒感染。腺病毒的血清學(xué)檢測特別重要，因為 它可確定病人是否是急性腺病毒感染，另外它也用于大型流行病學(xué)的調(diào)查研究。ELISA主要測抗六聯(lián)體成分上群特異性決定簇的抗體。建議用于檢測特異性抗體 的檢測方法有：血凝抑制和血清中和實驗。由于腺病毒到處都存在以及相關(guān)血清型之間的交叉反應(yīng)，為了確定感染，可使抗體濃度提高4倍或更高的血清轉(zhuǎn)化就很有 必要了。在血清學(xué)檢測中，IgG是主要被檢測的抗體。
3、實驗原理
此固相ELISA試劑盒利用的是夾心法。包被孔中包被了抗原。用對IgM具有特異性的酶標(biāo)二抗來檢測結(jié)合到包被抗原上的樣品特異性抗原。底物反應(yīng)后，所顯示的顏色強度與IgM特異性抗體的濃度成正比。樣品的結(jié)果可直接用標(biāo)準曲線獲得。
4、試劑盒組成：
| 4×2ml | 標(biāo)準品A-D | 1；10；40；150U/mL，待用 標(biāo)準品A=陰性質(zhì)控 標(biāo)準品B=臨界質(zhì)控 標(biāo)準品C=弱陽性質(zhì)控 標(biāo)準品D=陽性質(zhì)控 內(nèi)含抗腺病毒的IgM抗體，PBS（磷酸緩沖液），穩(wěn)定劑。 |
| 1×14ml | 酶標(biāo)IgM | 紅色，待用。內(nèi)含過氧酶標(biāo)記的抗人IgM，蛋白緩沖液，穩(wěn)定劑。 |
| 1×12×8 | 包被板 | 可拆，包被有特異性抗原。 |
| 1×14ml | TMB底物液 | 含TMB |
| 1×14ml | TMB終止液 | 0.5M的H2SO4 |
| 1×60ml | 稀釋液 | 含PBS緩沖液，＜0.1%NaN3 |
| 1×60ml | 濃縮洗滌液 | 濃縮型（10×），含PBS緩沖液，吐溫20 |
| 2× | 粘性金屬板 | 用于在溫育時遮蓋包被板 |
| 1× | 塑料袋 | 用于儲存不用的板條 |
5、實驗所需材料但試劑盒不提供
1） RF吸附劑
2） 移液器，體積：5；50；100；500 µL
3） 校準儀
4） 樣品稀釋用試管（1ml）
5） 帶試劑儲器8道移液器
6） 洗滌瓶，自動或半自動洗板機
7） 能在450nm處讀數(shù)的酶標(biāo)儀
8） 雙蒸水或去離子水
9） 吸水紙，取樣吸頭和計時器
6、實驗前的準備說明
6.1成分準備
| 稀釋/溶解 | 成分 | | 稀釋液 | 比例 | 備注 | 貯存 | 穩(wěn)定性 |
| 60ml | 洗滌液 | 加600ml | 雙蒸水 | 1：10 | 加熱至37°C以溶解結(jié)晶，充分混合 | 2-8°C | 8周 |
6.2樣品稀釋
| 樣品 | 稀釋 | 稀釋液 | 比例 | 備注 |
| 血清/血漿 | 全部稀釋 | 稀釋緩沖液 | 1：101 | 例：5µL+500µL |
6.3用RF吸附劑處理：
| 注意 | 為了避免特異性IgG和類風(fēng)濕因子的干擾，病人的血清應(yīng)當(dāng)用RF吸附劑處理（RE59059）。 標(biāo)準品和質(zhì)控品千萬不要用RF吸附劑處理。 |
| 1. | 在400µL按1：101的比例稀釋的樣品中加入20µL RF吸附劑。充分混合。 |
| 2. | 室溫（18-25℃）下溫育≥1min（＜15min） |
為了避免吸附特異性抗體，應(yīng)當(dāng)避免溫育時間＞15min。
預(yù)處理的樣品可能會是渾濁的。
7、實驗步驟：
1） 加100µL標(biāo)準品、質(zhì)控品或已稀釋樣本于相應(yīng)反應(yīng)孔中，在定性檢測中只使用標(biāo)準品B。
2） 封板后室溫（18℃-25℃）溫育60分鐘。
3） 移去粘性金屬板，棄去孔中液體。用300µL洗滌液洗板3次，在吸水紙上拍干。
4） 在每一微孔中加入100µL酶聯(lián)物。
5） 封板后室溫（18℃-25℃）溫育30分鐘。
6） 移去粘性金屬板，棄去孔中液體。用300µL洗滌液洗板3次，在吸水紙上拍干。加底物液和終止液時，如果有條件的話，可使用8孔微量移液器。確保底物液和終止液都是相同的時間間隔加入。使用確切容積并避免氣泡產(chǎn)生。
7） 每孔加TMB底物液100µL。
8） 室溫（18℃-25℃）避光溫育20分鐘。
9） 在每一微孔中加入100µLTMB終止液以終止底物反應(yīng)。輕輕搖動包被板以使試劑混合均勻。此時，顏色藍色變成黃色。
10） 加終止液后60分鐘內(nèi)在450nm處測OD值。
8、結(jié)果計算
在半對數(shù)坐標(biāo)紙上或用自動生成的方法，以標(biāo)準品的OD值為Y軸，濃度為X軸，繪制一標(biāo)準曲線圖。用立體圖、4參數(shù)對 數(shù)圖或?qū)?shù)-對數(shù)圖都可獲得良好的實驗結(jié)果。對于標(biāo)準曲線圖，用標(biāo)準品的每一單值進行計算（樣品結(jié)果明顯異常的值必須刪除掉，應(yīng)使用更加合理的單值）。樣 品的濃度可直接從標(biāo)準曲線上獲得。一旦樣品稀釋了，就應(yīng)當(dāng)乘以相應(yīng)的稀釋因子。如果樣品所測得的濃度高于zui高標(biāo)準，則應(yīng)根據(jù)實驗前的準備說明所述對樣品進 行稀釋，并重新檢測。
9、結(jié)果判定： ＞ 12 U/ml 為陽性,8 - 12 U/ml 為可疑,＜ 8 U/ml 為陰性
此檢測結(jié)果并不是任何治療結(jié)果判定的*因素，它應(yīng)當(dāng)結(jié)合臨床觀察和診斷結(jié)果加以判斷。
本譯文由健侖生物研究人員翻譯僅供參考，詳情請以原文為準。
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