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測定意義

氮素是構(gòu)成生物體的一種必需元素，自然界中的氮素循環(huán)包括許多轉(zhuǎn)化作用?？諝庵械牡?dú)獗还痰⑸锛爸参锱c微生物的共生體固定成氨態(tài)氮，經(jīng)過硝化微生物的作用轉(zhuǎn)化成硝態(tài)氮，后者被植物或微生物同化成有機(jī)氮化物，植物組織氨氮含量可反映植物受脅迫的程度。

測定原理

α-氨基酸與水合茚三酮溶液一起加熱，經(jīng)氧化脫氨變成相應(yīng)的α-酮酸，酮酸進(jìn)一步脫羧變成醛，水合茚三酮則被還原，在弱酸環(huán)境中，還原型茚三酮，氨和另一分子水合茚三酮反應(yīng)， 縮合生成藍(lán)紫色物質(zhì)，在580nm處有特征吸收峰。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器

天平、研缽、常溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。

試劑組成和配制

提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存。

試劑一：液體9mL×1瓶，4℃保存。

試劑二：粉劑×1瓶，4℃避光保存。臨用前加1.5mL蒸餾水充分溶解。

試劑三：液體15mL×1瓶，4℃保存。

樣本處理

按照質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，室溫勻漿后于25℃，12000g離心10min，取上清待測。

測定操作表

注意：空白管只需測定一次。

計(jì)算公式

1. 用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=0.1535x-0.0279，R2=0.9993

NH4+—N含量（μg/g 鮮重）=（△A+0.0279）÷ 0.1535×V反總÷（W×V樣÷V樣總）

                = 32.9×（△A+0.0279）÷W

V反總：反應(yīng)總體積，0.315mL；V樣：反應(yīng)體系中加入樣本體積，0.06mL；V樣總：加入提取液體積，1mL，W：樣本質(zhì)量，g

2. 用96孔板測定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=0.0768x-0.0279，R2=0.9993

NH4+—N含量（μg/g 鮮重）=（△A+0.0279）÷ 0.0768×V反總÷（W×V樣÷V樣總）

                = 65.8×（△A+0.0279）÷W

V反總：反應(yīng)總體積，0.315mL；V樣：反應(yīng)體系中加入樣本體積，0.06mL；V樣總：加入提取液體積，1mL，W：樣本質(zhì)量，g

注意事項(xiàng)

1. 提取好的待測液盡快測定，低溫保存不得超過24小時(shí)。

2. 沸水浴時(shí)間不宜過長，否則會對測定結(jié)果有影響。

3. 顯色后20min內(nèi)完成測定。

4. 檢出限為18μg/g。

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