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測定意義：

糖類物質(zhì)是構(gòu)成植物體的重要組成成分之一，也是新陳代謝的主要原料和貯存物質(zhì)。可溶性糖是指樣品中的還原單糖及在本法測定條件下能水解成還原單糖的蔗糖、麥芽糖和可部分水解為葡萄糖的淀粉。

測定原理：

蒽酮比色法?？捎糜诳扇苄詥翁恰⒐烟呛投嗵堑暮繙y定，具有靈敏度高﹑簡便快捷﹑適用于微量樣品的測定等優(yōu)點。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計/酶標儀、沸水浴、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、濃硫酸（不允許快遞）研缽、和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

試劑一：粉劑×1瓶，4℃避光保存；
試劑二：10mL×1瓶 ，4℃保存；

樣品中可溶性糖的提取：

稱取0.1~0.2g樣本，加入1mL蒸餾水研磨成勻漿，倒入有蓋離心管中，95℃水浴10min（蓋緊，以防止水分散失），冷卻后，8000g，25℃離心10min，取上清液于10ml試管中，用蒸餾水定容至10mL，搖勻備用。

測定步驟

1、分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至620nm，蒸餾水調(diào)零。

2、調(diào)節(jié)水浴鍋至95度。

3、工作液的配制：在試劑一中加入2.5mL試劑二。充分溶解后使用，如較難溶解，可加熱攪拌；用不完的試劑4℃保存一周；

4、加樣表（在EP管中反應）：

混勻，置95度水浴中10min（蓋緊，以防止水分散失），冷卻至室溫后，取200 uL轉(zhuǎn)移至微量石英比色皿或96孔板中，于620nm處，分別讀取空白管和測定管吸光值，ΔA=A測定管-A空白管。

注意：1、空白管只要做一管。

      2、如果ΔA大于1，需要將樣本用蒸餾水稀釋，計算公式中乘以相應稀釋倍數(shù)。

3、由于濃硫酸具有強腐蝕性，請謹慎操作。

可溶性糖含量計算：

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1、標準條件下測定的回歸方程為y = 8.55x - 0.07；x為標準品濃度（mg/mL），y為吸光值。

2、按樣本鮮重計算：

可溶性糖（mg /g鮮重）= [(ΔA＋0.07) ÷8.55×V1]÷（W×V1÷V2）=1.17×(ΔA＋0.07) ÷W。

3、按樣本蛋白濃度計算：

可溶性糖（mg /mg prot）=[ (ΔA＋0.07) ÷8.55×V1]÷(V1×Cpr)=0.117×(ΔA＋0.07) ÷Cpr。

V1：加入樣本體積，0.04mL；V2：加入提取液體積，10mL； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g。

b.用96孔板測定的計算公式如下

1、標準條件下測定的回歸方程為y = 4.275x - 0.07；x為標準品濃度（mg/mL），y為吸光值。

2、按樣本鮮重計算：

可溶性糖（mg /g鮮重）= [(ΔA＋0.07) ÷4.275×V1]÷（W×V1÷V2）=2.34×(ΔA＋0.07) ÷W。

3、按樣本蛋白濃度計算：

可溶性糖（mg /mg prot）= [(ΔA＋0.07) ÷4.275×V1]÷(V1×Cpr)=0.234×(ΔA＋0.07) ÷Cpr。

V1：加入樣本體積，0.04mL；V2：加入提取液體積，10mL； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g。

注意：檢測限為1mg/g鮮重或10ng/ mg prot

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