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產品簡介：

β-甘露聚糖酶（

EC 3.2.1.78）廣泛存在于動植物和微生物中。用于飼料業(yè)，不僅可以消除飼料中的抗營養(yǎng)因子甘露聚糖，提高飼料利用率，還能促進有益菌的增殖，提高動物免疫功能。

β-甘露聚糖酶水解甘露聚糖產生寡糖和單糖，還原性寡糖和單糖在沸水浴中與3,5-二硝基水楊酸（DNS試劑）反應顯色反應，該顯色物質在540nm下有最大吸收峰，通過測定還原性糖的生成量進而計算得出β-甘露聚糖酶的酶活性大小。

所需的儀器和用品：

可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、水浴鍋、離心機、可調式移液器、

研缽、乙醇、冰和蒸餾水。

試劑盒組分與配制：

提取液：液體 60mL ×1 瓶，4℃保存；

試劑一：液體 15mL ×1 瓶，4℃保存；

試劑二：粉劑 ×2 瓶，4℃保存；臨用前甩幾下使粉體落入底部，每瓶加 5mL 試劑一，可超聲至溶解，溶解后 4℃保存。

試劑三：液體 10mL ×2 瓶，4℃保存；

β-甘露聚糖酶活性測定：
一、樣本制備：
1、 組織：
1. 稱取約 0.2g 組織（水分充足的樣本可取 1g），加入 1mL 經預冷的 95%乙醇冰浴勻漿，
4℃放置 10min；離心 5min（12,000rpm 4℃）；棄上清，留沉淀，
2. 向沉淀中加入經預冷的 80%乙醇混勻，4℃放置 10min；離心 5min（12,000rpm 4℃）；
棄上清，留沉淀。
3. 再向沉淀中加入 1mL 經預冷提取液，渦旋混勻，4℃放置 10min；離心 10min
（12,000rpm 4℃）；留上清，棄沉淀。上清液置冰上待測。
2、 細菌/培養(yǎng)細胞：
1. 先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；
2. 取約 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液，超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％
或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）；
3. 離心 10min（12,000rpm 4℃），取上清，置冰上待測。
【注】：若增加樣本量，可按照細菌或細胞數量（10
4 個）：提取液體積（mL）為 500：1
的比例進行提取。
3、 液體樣本：
a) 若是澄清液體，直接檢測；
b) 若液體樣本渾濁，需離心 10min（12,000rpm 4℃），取上清液檢測。

2、上機檢測：
1、 可見分光光度計預熱 30min 以上，調節(jié)波長至540nm，蒸餾水調零。
2、 所有試劑解凍至室溫（25℃），
3、 在 EP 管中依次加入：

【注】若ΔA 差值低于 0.01，可增加樣本取樣質量 W 或延長孵育時間 T(如增至 60min)或
增加樣本加樣體積 V1（如增至 120μL，則試劑二相應減少），則改變后的 W 和 T 和 V1
需代入計算公式重新計算。 結果計算：
1、標準曲線方程為 y = 8.2857x - 0.0325；x 為標準品質量（mg），y 為ΔA。

2、按照蛋白濃度計算：
單位定義：每毫克組織蛋白每小時催化底物產生 1μmol 還原糖定義為一個酶活力單位。
β-甘露聚糖酶活力(μmol/h/mg prot)=[(ΔA+0.0325)÷8.2857÷Mr×10
3
]÷(Cpr×V1)÷T =16.8×(ΔA+0.0325) ÷Cpr
3、按樣本鮮重計算：
單位定義：每克組織每小時催化底物產生 1μmol 還原糖定義為一個酶活力單位。
β-甘露聚糖酶活力(μmol/h/g 鮮重)=[(ΔA+0.0325)÷8.2857÷Mr×10
3
]÷(W×V1÷V)÷T =16.8×(ΔA+0.0325)÷W
4、按細菌/細胞密度計算：
單位定義：每 1 萬個細菌或細胞每小時催化底物產生 1nmol 還原糖定為一個酶活力單位。
β-甘露聚糖酶活力(nmol/h/10
4cell)=[(ΔA+0.0325)÷8.2857÷Mr×10
6
]÷(500×V1÷V)÷T =16.8×(ΔA+0.0325)
5、按液體體積計算：
單位定義：每毫升液體每小時催化底物產生 1nmol 還原糖定義為一個酶活力單位。
β-甘露聚糖酶活力(μmol/h/mL)=[(ΔA+0.0325)÷8.2857÷Mr×10
6
]÷V1÷T =16.8×(ΔA+0.0325)
V---加入提取液體積，1 mL；
V1---加入樣本體積，0.08mL；
T---反應時間，30 min=0.5 小時；
W---樣本質量，g；
500---細菌或細胞總數，萬；
Mr---180.55，標準品為甘露糖；
Cpr---樣本蛋白質濃度，mg/mL；建議使用本公司的 BCA 蛋白含量檢測試劑盒；

公司正在出售的產品：