【參數(shù)信息】

英文名稱：Bluo-Gal β-半乳糖苷酶顯色底物（藍(lán)色）

中文名稱：5-溴-3-吲哚-β-D-吡喃半乳糖苷

CAS NO：97753-82-7

化學(xué)名：5-bromo-1H-indol-3-yl β-D-galactopyranoside

分子式：C14H16BrNO6

分子量：374.2 g/mol

外觀：類白色粉末

溶解性：溶于DMF，DMSO

純度：≥95%

儲(chǔ)存條件：-20℃避光干燥

生產(chǎn)廠商：西安強(qiáng)化生物科技

【簡(jiǎn)單概述】

Bluo-Gal是β-半乳糖苷酶（β-galactosidase）的一種顯色底物，屬于鹵代吲哚基-β-半乳糖苷類化合物。

Bluo-Gal β-半乳糖苷酶顯色底物（藍(lán)色）是傳統(tǒng)底物X-Gal的替代品，能產(chǎn)生較深的藍(lán)色沉淀，適用于組織化學(xué)檢測(cè)、藍(lán)白篩選等場(chǎng)景。

顯色原理：

Bluo-Gal是β-半乳糖苷酶的顯色底物，被酶水解后生成不溶于乙醇和二甲苯的深藍(lán)色沉淀，顯色效果比傳統(tǒng)底物X-Gal深。

適用于檢測(cè)表達(dá)β-半乳糖苷酶的細(xì)菌、病毒斑、組織切片或細(xì)胞。

可與鏈霉親和素-β-半乳糖苷酶偶聯(lián)物聯(lián)用，用于免疫印跡和免疫細(xì)胞化學(xué)分析。

【實(shí)驗(yàn)流程（分場(chǎng)景）】

【場(chǎng)景一】：細(xì)菌菌落篩選（藍(lán)白斑實(shí)驗(yàn)）

培養(yǎng)基準(zhǔn)備：

將Bluo-Gal加入瓊脂培養(yǎng)基中，終濃度至少300µg/ml。

培養(yǎng)基pH需調(diào)至7.0-8.0，冷卻至45-55°C后再加入Bluo-Gal，避免高溫降解。

可添加IPTG誘導(dǎo)lacZ基因表達(dá)。

接種與觀察：

涂布細(xì)菌后，37°C培養(yǎng)12-24小時(shí)。

lac?菌落：呈現(xiàn)深藍(lán)色；lac?菌落：無(wú)色或白色。

【場(chǎng)景二】：細(xì)胞或組織染色（衰老檢測(cè)/免疫分析）

樣本處理：

固定：用β-半乳糖苷酶固定液，室溫固定15分鐘。

洗滌：PBS清洗3次，每次3分鐘，去除固定液殘留。

染色工作液配制：

按比例混合染色液。

關(guān)鍵條件：

pH需調(diào)至6.0（衰老檢測(cè)）或7.0-8.0（其他應(yīng)用）。

禁用CO2培養(yǎng)箱：避免pH波動(dòng)影響顯色。

染色與觀察：

加入染色工作液覆蓋樣本，37°C避光孵育過(guò)夜。

棄染色液，PBS清洗后，用光學(xué)顯微鏡觀察：

陽(yáng)性細(xì)胞/組織：深藍(lán)色顆粒。

輔助步驟：可加核固紅染核增強(qiáng)對(duì)比。

【場(chǎng)景三】：免疫印跡/免疫細(xì)胞化學(xué)

樣本處理：

常規(guī)電泳或細(xì)胞固定后，與鏈霉親和素-β-半乳糖苷酶偶聯(lián)物孵育。

顯色：

加入Bluo-Gal工作液，室溫反應(yīng)至藍(lán)色條帶/沉淀出現(xiàn)。

終止反應(yīng)后觀察，沉淀不溶于有機(jī)溶劑。

【相關(guān)試劑】

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GYY 4137 (H2S Donor)

N-Acetyl-L-Cysteine (NAC)

Fluo-4?Pentapotassium?Salt

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