【使用步驟】
（1）工作液配制
稀釋方法：用培養(yǎng)基或緩沖液將1 mM儲(chǔ)存液稀釋至1–5 μM（推薦≥1 μM），現(xiàn)配現(xiàn)用，避光操作。
優(yōu)化建議：低濃度可減少假陽(yáng)性，染色后若熒光減弱需避免長(zhǎng)時(shí)間孵育。
（2）細(xì)胞染色流程
貼壁細(xì)胞：
細(xì)胞鋪于蓋玻片，80%融合后吸除培養(yǎng)液。
加入37℃預(yù)熱的含探針培養(yǎng)基，孵育30分鐘–2小時(shí)。
PBS洗滌2次，熒光顯微鏡觀察。
懸浮細(xì)胞：
離心收集細(xì)胞，用含探針培養(yǎng)基重懸，避光震蕩孵育。
離心后PBS洗滌，熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀檢測(cè)。
注意事項(xiàng)：孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)（>2小時(shí)）可能導(dǎo)致溶酶體pH升高（堿性效應(yīng)），建議縮短至5分鐘內(nèi)用于pH檢測(cè)。
（3）pH校準(zhǔn)
標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)建立：
用含10 μM尼日利亞菌素的pH校準(zhǔn)緩沖液（pH 3.5–6.0）處理細(xì)胞10分鐘。
測(cè)量不同pH下的熒光強(qiáng)度比值，繪制校準(zhǔn)曲線(xiàn)。
【技術(shù)參數(shù)】
試劑名稱(chēng)：溶酶體黃/藍(lán)熒光探針LysoSensor DND-160
分子式：C20H22N4O3
分子量：366.42 g/mol
顏色：Yellow、blue
外觀：溶液
亞細(xì)胞定位：溶酶體
檢測(cè)儀器：熒光顯微鏡
純度：≥95%
儲(chǔ)存條件：-20℃避光干燥
【工作原理】
雙發(fā)射峰特性：
中性環(huán)境（pH≈7）：激發(fā)329 nm，發(fā)射440 nm（藍(lán)色熒光）。
酸性環(huán)境（pH<4.5）：激發(fā)384 nm，發(fā)射540 nm（黃色熒光）。
pKa值：≈4.2，對(duì)溶酶體pH高度敏感。
比率分析機(jī)制：
溶酶體黃/藍(lán)熒光探針LysoSensor DND-160通過(guò)發(fā)射光譜比率（I???/I???）消除探針濃度、細(xì)胞厚度等干擾，實(shí)現(xiàn)定量pH檢測(cè)。
激發(fā)等吸點(diǎn)（～360 nm）用于雙發(fā)射峰同步激發(fā)，提高信噪比。
【相關(guān)的試劑】
FITC Phalloidin
APC-Streptavidin
PE-Streptavidin
Mag-520 Potassium Salt
CAY10731(H2S Probe)
PE-Cy7標(biāo)記鏈霉親和素
Indo-1,AM,Cell Permeant
Pentafluorobenzenesulfonyl fluorescein
ZnAF-2F,Cell lmpermeant鋅離子熒光探針
ZnAF-2F DA,Cell Permeant鋅離子熒光探針
Indo-1 Pentapotassium Salt, Cell lmpermeant
PSP (Hydrogen Polysulfide Probe)多硫化氫熒光探針
注意：本試劑用于科研領(lǐng)域，其他用途概不適用！
編輯：以上內(nèi)容由西安強(qiáng)化生物科技xxn整理！
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