試劑名稱：LysoSensor Yellow/Blue DND-160 溶酶體黃/藍(lán)色熒光探針

儲存：-20℃干燥避光保存至少1年，冰袋運輸。

產(chǎn)地：西安強化生物

分子式：C20H22N4O3

分子量：366.42 g/mol

一、描述與基本特性：

LysoSensor Yellow/Blue DND-160是一種比率型熒光探針，用于活細(xì)胞內(nèi)酸性細(xì)胞器的pH值測量。

靶向酸性細(xì)胞器的原理

DND-160通過以下機制特異性富集于溶酶體等酸性區(qū)室：

質(zhì)子化富集效應(yīng)：

探針的弱堿性基團在低pH環(huán)境中結(jié)合質(zhì)子，形成帶正電的離子態(tài)，使其無法穿透脂質(zhì)膜而滯留于酸性細(xì)胞器內(nèi)。

質(zhì)子化緩解熒光猝滅：質(zhì)子化后，分子內(nèi)電荷轉(zhuǎn)移受抑制，熒光強度增強（可達(dá)100倍），實現(xiàn)信號放大。

比率檢測機制：

雙發(fā)射光譜特性：通過測量藍(lán)光（440 nm）與黃光（540 nm）的發(fā)射強度比率，可直接反映pH值，避免因探針濃度、光漂白或細(xì)胞厚度差異導(dǎo)致的誤差。

動態(tài)響應(yīng)范圍：pH 3.5–6.0，覆蓋溶酶體生理pH（4.5–5.5）。

溶酶體動態(tài)研究：

生成與融合：通過時間分辨成像，可追蹤溶酶體形成、成熟及與自噬體融合過程。

膜通透性：探針滯留能力可反映溶酶體膜完整性，如凋亡過程中膜通透性增加導(dǎo)致探針泄漏。

二、染色步驟

【工作液配制】

將1 mM原液用培養(yǎng)基稀釋至 工作濃度（通?！? μM），現(xiàn)配現(xiàn)用。

【細(xì)胞染色】

細(xì)胞類型：貼壁細(xì)胞

操作步驟：

① 蓋玻片培養(yǎng)細(xì)胞；

② 替換為含探針工作液；

③ 37°C避光孵育30 min–2 h。

細(xì)胞類型：懸浮細(xì)胞

操作步驟：

① 離心收集細(xì)胞；

② 重懸于工作液；

③ 同上孵育后離心洗滌 。

成像參數(shù)：

激發(fā)波長：360–365 nm（等吸點附近）

發(fā)射通道：雙通道采集。

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用于科研相關(guān)領(lǐng)域，不能用于人體實驗！

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