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乳酸脫氫酶活性(WST-8法) 微量法產(chǎn)品參數(shù)
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乳酸脫氫酶活性(WST-8法) 微量法詳細(xì)信息
?乳酸脫氫酶（LDH）活性微量法測(cè)定的原理?是通過(guò)檢測(cè)LDH催化丙酮酸還原為乳酸的過(guò)程中NADH的生成量來(lái)間接測(cè)定LDH的活性。
具體過(guò)程如下：
?反應(yīng)原理?：在LDH的作用下，NAD+被還原生成NADH。NADH與WST-8相互作用產(chǎn)生顏色，從而進(jìn)行比色測(cè)定（λmax=450 nm）?。
?反應(yīng)條件?：LDH將NAD還原為NADH，NADH與WST-8相互作用產(chǎn)生顏色。這個(gè)反應(yīng)在冰上避光進(jìn)行，各組分（如Assay Buffer、Lactate、NAD、WST-8、Enhancer）需在實(shí)驗(yàn)前從冰箱中取出并平衡至室溫，整個(gè)過(guò)程需避光操作?。
?吸光度測(cè)量?：在450 nm波長(zhǎng)下測(cè)量吸光度，吸光度與LDH活性成正比，可以通過(guò)比色法測(cè)定LDH的活性?。
?實(shí)驗(yàn)步驟和所需設(shè)備?：
?實(shí)驗(yàn)步驟?：準(zhǔn)備工作液（1×Assay Buffer、NAD、WST-8、Enhancer和Lactate混合均勻），將工作液加入96孔板或微量玻璃比色皿中，加入待測(cè)樣品，37℃恒溫孵育一定時(shí)間后測(cè)量吸光度?。
?所需設(shè)備?：酶標(biāo)儀或可見(jiàn)分光光度計(jì)（能測(cè)450 nm處的吸光度）、恒溫箱、制冰機(jī)、低溫離心機(jī)、96孔板或微量玻璃比色皿、可調(diào)節(jié)式移液槍及槍頭、去離子水、勻漿器（如果是組織樣本）?。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)?：
?試劑保存?：各組分（如Assay Buffer、Lactate、NAD、WST-8、Enhancer）需在冰上避光保存，避免反復(fù)凍融?。
?操作注意事項(xiàng)?：整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程需在冰上避光進(jìn)行，避免光照影響結(jié)果?。
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