產(chǎn)品信息

　　產(chǎn)品名稱測定方法產(chǎn)品編號規(guī)格

　　*含量（H2O2）試劑盒 分光光度法HRK052150管/48樣

　　正式測定前取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

　　測定意義

　　H2O2是生物體內(nèi)最常見的活性氧分子，主要由SOD和XOD等催化產(chǎn)生，由CAT和POD等催化降解。H2O2不僅是重要的活性氧之一，也是活性氧相互轉(zhuǎn)化的樞紐。一方面，H2O2可以直接或間接地氧化細(xì)胞內(nèi)核酸，蛋白質(zhì)等生物大分子，并使細(xì)胞膜遭受損害，從而加速細(xì)胞的衰老和解體;另一方面H2O2也是許多氧化應(yīng)急反應(yīng)中的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子。

　　測定原理

　　H2O2與硫酸鈦生成黃色的過氧化鈦復(fù)合物，在415nm有特征吸收。

　　需自備的儀器和用品

　　可見分光光度計、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1 mL玻璃比色皿、丙酮60mL、濃鹽酸10mL、研缽和冰。

　　試劑的組成和配制

　　試劑一：丙酮60mL×1瓶，4℃保存;(自備)

　　試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存;臨用前加入10mL濃鹽酸充分溶解備用。用不完的試劑4℃保存;(溶解時間較長，約30min，可40℃-60℃加熱溶解，務(wù)必提前準(zhǔn)備)

　　試劑三：15mL×1瓶，4℃保存;

　　試劑四：60mL×1瓶，4℃保存;

　　H2O2提取

　　1、細(xì)菌或細(xì)胞樣品的制備：收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個)：試劑一體積(mL)為500~1000：1的比例(建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL試劑一)，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴，功率20%或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次);用試劑一定容至1mL;8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

　　2、組織樣品的制備：按照組織質(zhì)量(g)：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例(建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一)進(jìn)行冰浴勻漿;轉(zhuǎn)移至EP管中，用試劑一定容至1mL，8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

　　3、血清(漿)樣品：直接檢測。

　　測定步驟

　　1.分光光度計預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至415nm，蒸餾水調(diào)零。

　　2.將試劑二、三和四37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)水浴10min以上。

　　3.在EP管中按順序加入下列試劑

　　試劑名稱(μL)測定管對照管

　　樣本吸取的量的為全部上清液

　　試劑一1000

　　試劑二100100

　　試劑三200200

　　4000g，25℃離心10min，棄上清，留沉淀

　　試劑四10001000

　　加入試劑四溶解沉淀后，室溫靜置5min，倒入比色皿中，測定415nm處吸光值A(chǔ)。對照管只要做一次即可。計算ΔA=A測定-A對照。

　　注意事項

　　1、由于試劑一易揮發(fā)，試劑一必須先預(yù)冷再加，研磨時必須在冰上研磨。

　　2、本試劑盒中試劑的揮發(fā)性較高，請帶一次性手套和口罩。

　　注意事項

　　本產(chǎn)品僅作科研用途!

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