美國INBIOS黑熱病抗體快速檢測試劑卡

【預(yù)期使用】

   該檢測條用于診斷內(nèi)臟利什曼病，利用快速的免疫層析法在人血清中定性檢測杜氏利什曼原蟲（L. donovani）抗體。該實驗有助于診斷內(nèi)臟利什曼病（VL）。并只用于體外診斷。

【實驗原理】

   該檢測條的硝化纖維膜在實驗區(qū)包被了rK39，在質(zhì)控區(qū)包被了雞抗蛋白A。在實驗中，血清樣本與膠體金共軛物（膠體金標記的蛋白A）反應(yīng)，而膠體金共軛物預(yù)先包被在檢測條上。混合物在毛細管作用下沿著硝化纖維膜移動，然后與重組的VL抗原反應(yīng)，并生成一條紅色帶。如果存在該紅色帶表明陽性結(jié)果，反之則為陰性結(jié)果。混合物繼續(xù)移動，到達固化的雞抗蛋白A區(qū)（質(zhì)控區(qū)），會在質(zhì)控區(qū)生成一條紅色帶。質(zhì)控區(qū)紅色帶的出現(xiàn)說明樣本體積充足、液體流動適宜和作為對試劑的質(zhì)控。

【保存方法】

   該密封袋或者瓶中含實驗檢測條應(yīng)保存在20—28℃（室溫）直至有效期。瓶中含捕獲緩沖液也應(yīng)保存在20—28℃。暴露在超過30℃溫度下會影響實驗性能，所以應(yīng)盡量避免。檢測條不應(yīng)冰凍保存。從密封袋中取出后應(yīng)在1小時內(nèi)使用，避免受濕度影響。

【試劑盒組成成分】

• 檢測條 25份

• 緩沖液一瓶

【儲存條件】
檢測條應(yīng)保存在20~30℃（室溫）直至有效期。Chase緩沖液也應(yīng)保存在20~30℃。暴露在超過30℃溫度下（多5天）會影響檢測性能，所以應(yīng)盡量避免。檢測條不應(yīng)冷凍保存，并且從密封袋中取出后應(yīng)在0.5小時內(nèi)使用，避免受濕度影響。

【樣本要求】

• 該實驗中應(yīng)使用犬血清，不能使用全血樣本。不能對樣本進行稀釋，

• 凝血后盡快離心分離血清，以避免溶血現(xiàn)象的產(chǎn)生。

• 應(yīng)在采集血清后盡快進行實驗。血清不能長時間存放在室溫下。血清于2~8℃可保存3天，更長時間則應(yīng)保存在-20℃以下。

• 實驗前血清平衡至室溫。冷凍的血清必須充分融解。避免反復(fù)凍融。

• 如果血清需要運輸，其包裝應(yīng)該符合聯(lián)邦的傳染源運輸法規(guī)。

【檢測步驟】

• 實驗前讓血清平衡至室溫

• 從密封袋或瓶中取出檢測條

• 在檢測條箭頭下方加樣區(qū)加入20ul的血清

• 在小試管中，或者96孔的組織培養(yǎng)板的微孔中加入2-3滴（150ul）的Chase緩沖液

將檢測條插入小試管或者微孔中，根據(jù)檢測條上的箭頭，其末端應(yīng)該朝下

• 在10分鐘內(nèi)讀取結(jié)果。在讀取結(jié)果前，背景的清晰度是十分重要的。尤其是當樣本含低滴度的抗利什曼原蟲抗體時，就只有一條很弱的色帶出現(xiàn)在實驗區(qū)（T）。10分鐘后讀取可能會導致錯誤結(jié)果

注意：不要只是加入Chase緩沖液進行實驗。必須首先加入20ul的血清。

如果在加入捕獲緩沖液后的10-15秒并沒有觀察到膠體金的移動，可輕輕壓檢測條上的樣本加入?yún)^(qū)，直到觀察到膠體金的移動。

【結(jié)果解釋】

陽性結(jié)果

實驗陽性則質(zhì)控帶（C）和實驗帶（T）均出現(xiàn)。一條微弱的色帶也為陽性結(jié)果。作為解釋指南，實驗區(qū)的紅色帶的顏色強度與抗利什曼原蟲抗體濃度相關(guān)。實驗帶為“弱陽性"血清樣本，實驗結(jié)果可能為弱陽性但可分辨的紅色帶，（“弱陽性"樣本則含有對重組抗原低親和力或者低滴度抗體）。

陰性結(jié)果

實驗為陰性，則只有質(zhì)控帶出現(xiàn)。沒有出現(xiàn)實驗帶

無效結(jié)果

質(zhì)控帶和檢測帶都沒有出現(xiàn)結(jié)果，若只有檢測帶出現(xiàn)紅色線，而質(zhì)控帶沒有出現(xiàn)，則也為無效結(jié)果

建議使用新的檢測條和新血清再次進行實驗。

注意：實驗區(qū)的紅色帶的變化是依賴于抗利什曼原蟲抗體濃度。然而，該實驗不能檢測抗體的定量值和增加的百分比。

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