質量光度儀

2018年，牛津大學的Philipp Kukura團隊宣布一種全新技術：在干涉反射顯微鏡和干涉散射顯微鏡的原理之上，通過單分子散射光的方式準確測量溶液中單個分子的質量，為生物分析和研究生物分子的功能開辟了新的方法：質量光度法

質量光度法是一種革命性的分析生物分子的新方法，即超微量單分子質量和分布測量分析法是一種革命性的分析生物分子的新方法。它能夠在溶液中準確測量單個分子的質量，不需要任何偶聯固化或者標記標簽，在天然狀態(tài)下，完成對生物分子的分析。這種方法為生物分析和生物分子功能研究開辟了新的可能性 ，可以以很高的靈敏度、速度、準確度和簡單性來表征感興趣的分子，是監(jiān)測蛋白質純化、優(yōu)化樣品、研究蛋白質功能和相互作用的理想儀器。所有測量都可在各種各樣的天然緩沖液中逐個分子地完成，無需標記裝飾，就可以直觀地解釋質量分布結果。 

質量光度儀分析儀器的特點：

· 準確表征樣品的天然屬性；

• 保持結構完整性和活性； 

測量只需要幾微升的樣品；

• 設計緊湊的臺式儀器，無特殊安裝要求；

• 軟件自動控制采集過程，并在幾分鐘內進行質量分析；

• 直觀地解釋質量分布的結果，而不需要任何經驗和知識；

• 準確測量在溶液（而不需真空）中的蛋白分子質量；

• 單分子分析，可靠區(qū)分樣品中所有已知和未知組分，高精度捕獲高豐度和低豐度分子；

• 快速、簡單、最小樣本量：納米濃度下的微升樣品體積，幾分鐘內獲得結果，寬質量范圍和高動態(tài)范圍；

質量光度儀分析儀器應用領域  ：

樣品純度和成分分析 Sample characterization  

異質生物分子的質量分析測量 Protein oligomerization

生物分子間相互作用 Biomolecular interactions

蛋白質復合物的組裝與化學計量 Macromolecular assemblies

質量光度法的技術路線：

質量光度法（一）-iSCAT法觀察單個分子

質量光度法（二）-SNR分析處理

質量光度法（三）-分子計數

質量光度法（四）-對比分子量轉換

質量光度儀TwoMP分析儀器的特點：

緊湊的臺式儀器，安裝要求低——測量只需要幾微升的樣品、和干凈、高質量的蓋玻片，幾分鐘內可獲得結果；

直觀高效——Refeyn的軟件自動控制采集過程，并在幾分鐘內完成質量分析。您可以直觀地解釋質量分布結果，而無需任何先驗知識；

的精確性——由于其高靈敏度，非常適合在生理（低）濃度下進行測量，而單分子計數技術固有的高動態(tài)范圍確保低豐度分子仍能被準確捕獲。質量光度法能輕松量化不同種類的蛋白質分子，具有高分辨率和重復性；

性能參數

原理：干涉光散射，無需標記

質量范圍：30kDa – 5MDa

測量精度：±2% @ 10 nm

單次測量質量誤差：±5% @ 10 nm

分辨率（FWHM）：25kDa @ 66kDa，60KDa @ 660 kDa

濃度范圍：100pM - 100nM（粒子濃度）

靈敏度：< 1ng蛋白質

樣品體積：5 - 20 μ l

幀率（標準設置）：1 kHz（原始），100 Hz（集成）

視場：4 x 11µm （@ 500 Hz）至12 x 17µm（@ 135 Hz）

波長：488 nm

像素尺寸：12nm