近年來隨著mRNA合成、化學修飾mRNA和遞送技術的發(fā)展，mRNA穩(wěn)定性和翻譯效率大幅提高，免疫原性逐步可控，其在腫瘤領域顯示了巨大的商業(yè)價值。mRNA技術產(chǎn)品是基于mRNA指導蛋白合成的“中心法則”，在體外設計合成含有編碼特定抗原的mRNA序列，經(jīng)過序列優(yōu)化、化學修飾和純化等加工，采用不同方式遞送至人體細胞，利用機體細胞翻譯產(chǎn)生蛋白、誘導免疫應答、補充機體蛋白、調(diào)節(jié)免疫等作用，從而預防或治療疾病。人類90%以上的疾病與蛋白質(zhì)相關，基于mRNA特性，mRNA技術在預防與治療疾病方面前景廣闊。

Fig1 mRNA 免疫

泰克生物能夠為客戶提供多種抗原（包括但不限于PTM蛋白、細胞內(nèi)蛋白、分泌蛋白）的mRNA免疫抗體制備服務，此外，泰克生物擁有包括從基因合成與修飾、AAV載體構建、動物免疫、雜交瘤細胞的融合與篩選、抗體生產(chǎn)等一站式技術服務，并且有配套的抗原抗體結合分析、抗原抗體BLI親和力測定、抗體細胞系驗證、等許多下游配套服務，為客戶的抗體藥研發(fā)與生產(chǎn)提供有力的支撐。

█ mRNA的免疫原性

純化的mRNA僅包含單鏈RNA （single-stranded RNA, ssRNA）分子，通過遞送系統(tǒng)包裹并以內(nèi)吞方式進入核內(nèi)體，進入核內(nèi)體后mRNA從遞送系統(tǒng)中釋放出來并被定位在膜上的Toll樣受體（Toll-like receptor, TLR)）7和TLR-8識別，導致下游的髓樣分化標記物88 （myeloid differentiation marker 88, MyD88）被激活，引起I型干擾素（interferon, IFN）激活和炎癥因子的分泌。

█ mRNA疫苗制備過程

1. 制備IVT mRNA：抗原選擇、線性DNA模板合成、體外轉錄和mRNA純化。在對病原體的基因組進行測序后選擇目標抗原時，將其插入質(zhì)粒 DNA 模板中。生產(chǎn) DNA 模板應包含抗原序列、5′和3′ UTR以及5′UTR上游的T7啟動子。體外轉錄過程需要 DNA 模板、修飾或未修飾的核苷和 T7 RNA 聚合酶。

2. mRNA進入細胞質(zhì)需要借助載體，mRNA疫苗的遞送載體包括病毒載體和非病毒載體兩種：病毒載體以慢病毒、腺病毒相關病毒和仙臺病毒等為主，病毒載體在進行核酸遞送的同時也可能會引起免疫反應，從而影響疫苗的效果，非病毒載體主要包括脂質(zhì)體、樹突狀細胞(dendritic cell, DC)、無機納米粒子、陽離子細胞穿膜肽等。

█ mRNA遞送系統(tǒng)

1.裸mRNA直接注射法：直接注射至組織中，通常使用蔗糖、海藻糖溶液等緩沖液對mRNA進行一定的稀釋處理。優(yōu)點是成本低、方便快捷、缺點是mRNA極易被RNA酶降解，且難以穿過細胞膜。

2.體外DC負載：將mRNA離體加載或電穿孔入樹突狀細胞（Dendritic cells，DCs），體外負載樹突狀細胞有利于抗原呈遞細胞的有效靶向。

3.陽離子納米乳：一種基于水包油的遞送方式，由角鯊烯和表面活性劑如吐溫、生育酚等組成，MF59和AS03是2種水包油乳劑佐劑，應用于2009年的流感疫苗研究中。

█ mRNA藥物優(yōu)勢

（1）易在體外生產(chǎn)和純化，除去蛋白藥物及病毒載體制備的復雜過程，同時可避免宿主蛋白及病毒源性污染；

（2）IVT mRNA的生產(chǎn)工藝通用性強,可以快速應用于生產(chǎn)不同的目的蛋白,節(jié)省藥物研發(fā)時間,提高效率；

（3）mRNA僅需進入細胞質(zhì)即可翻譯成蛋白質(zhì)，無需進入細胞核，因此不存在基因的插入和整合，提高藥物的安全性；

（4）通過調(diào)節(jié)序列修飾和遞送載體可以改變其半衰期；

█ mRNA免疫服務流程

█ 服務優(yōu)勢

? 無需重組蛋白或多肽，省時省力

? 無抗原污染風險

? 生成具有高親和力和特異性的抗體

? 陽性的雜交瘤細胞株3-5株（小鼠單抗）

? 可提供抗體人源化服務并獲得的與原抗體具有相同的親和力的人源化抗體

? 可提供一系列抗體體外驗證服務

? 從基因合成與修飾、AAV載體構建、動物免疫、雜交瘤細胞的融合與篩選、抗體生產(chǎn)等一站式技術服務