PCR前的核酸提取過程操作復(fù)雜，耗時(shí)、好禮，難以實(shí)現(xiàn)高通量操作，且易造成實(shí)驗(yàn)室氣溶膠污染。本公司給予*的Direct Lysis試劑，開發(fā)了組織細(xì)胞直接擴(kuò)增技術(shù)，可不用提取核酸，對組織或細(xì)胞樣本簡單處理后，直接進(jìn)行PCR、RT-PCR、qPCR以及RT-PCR。該系列試劑盒可廣泛應(yīng)用于基因克隆、轉(zhuǎn)基因或基因敲除鑒定、基因表達(dá)分析、病毒診斷等PCR相關(guān)的各種實(shí)驗(yàn)。
產(chǎn)品優(yōu)勢：
低樣本量：樣品用量小，20-40ul即可滿足需求
快捷：30min內(nèi)制備模板，無需其他設(shè)備
高效：經(jīng)反復(fù)驗(yàn)證，可有效擴(kuò)增組織細(xì)胞中長達(dá)1800bp的DNA和RNA的片段
直接：無需柱純化、步驟簡單，降低氣溶膠產(chǎn)生
高通量：能夠在96孔板或8聯(lián)管中操作
RNA direct：RNA也可進(jìn)行直接擴(kuò)增，同類產(chǎn)品少，且對比競品效果優(yōu)
產(chǎn)品名稱：EZ011小鼠組織DNA直擴(kuò)PCR試劑盒
英文名稱：EZ Mouse DNA Direct PCR Kit
產(chǎn)品貨號：EZ011-01/EZ011-02
產(chǎn)品規(guī)格：50T/200T
產(chǎn)品價(jià)格：420/1350元
試劑盒應(yīng)用：轉(zhuǎn)基因小鼠、基因缺失小鼠鑒定。
試劑盒組成：MuDNA-EZ-1、MuDNA-EZ-2、MuDNA-EZ-3、2×TaqMix、H2O
保存條件：-20ºC保存。使用前將MuDNA-EZ-1、MuDNA-EZ-3在室溫或37ºC充分溶解。MuDNA-EZ-2、2×TaqMix使用時(shí)需置于冰上。
EZ011小鼠組織DNA直擴(kuò)PCR試劑盒使用方法：
（1）將MuDNA-EZ-1和MuDNA-EZ-2以25：1的比例混合均勻，并分裝每管26µL。
（2）剪取小鼠尾巴1-3毫米，*浸入上述溶液中。
（3）置于50ºC加熱30分鐘。
（4）置于95ºC加熱10分鐘。
（5）加入50µL MuDNA-EZ-3。
（4）取上述處理液進(jìn)行PCR擴(kuò)增。
*的PCR加樣體系
成分 | 總20 μL體系 |
2×TaqMix | 10 μL |
上游引物（10 μM） | 1 μL |
下游引物（10 μM） | 1 μL |
模板DNA | 2 μL |
H2O | 6 μL |
PCR反應(yīng)條件
步驟 | 溫度 | 時(shí)間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 94 oC | 5 min |
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變性 | 94 oC | 30 s |
30-35 |
退火 | 50~72 oC | 30 s | |
延伸 | 72 oC | 1 kb/min | |
zui終延伸 | 72 oC | 10 min |
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| 4 oC | Hold |
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注意事項(xiàng)
（1）剪取不同小鼠尾巴時(shí)，應(yīng)當(dāng)更換剪刀，用過的剪刀經(jīng)過84消毒液浸泡和凈水清洗后再使用。
（2）應(yīng)當(dāng)設(shè)置野生型小鼠的對照。
（3）PCR的退火溫度可根據(jù)引物的預(yù)測Tm值減去5ºC，或者通過梯度PCR摸索較佳退火溫度。
（4）TaqMix中加入了染料和相應(yīng)試劑，PCR后可直接進(jìn)行電泳，無需另加Loading buffer。
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