PCR 條件

反應體系

時間

無需摸索條件

50ul

1-2 天

需要摸索條件

50ul

3-4 天

差減雜交PCR

差減雜交(Subtractive hybridization)的原理非常簡單，首先將RNA反轉(zhuǎn)錄為雙鏈cDNA，稱為tester(含有目的基因)；對照RNA(不含目的基因)同樣處理，產(chǎn)生cDNA為driver，微量的tester和過量的driver在合適的條件下雜交，tester中和driver中相同的基因雜交子就被除去，在tester中*的基因被富集，通過PCR方法擴增出來，得到差減庫，擴增產(chǎn)物可以通過T載體直接克隆和測序分析。在探討兩個相關(guān)組織或兩個關(guān)聯(lián)過程中基因表達差異的情況，通過該方法可以獲得某些基因在某一樣品中表達，而在對應的樣品中不表達或表達量很低。
該方法也可以用于基因組特異片段的篩選，差別在于前者用mRNA為實驗材料，后者用基因組DNA或其它可比樣品的DNA為材料，兩者的后半部分實驗內(nèi)容*相同，前者得到的主要是差異表達的基因，后者得到的主要是差異片段。

客戶需提供兩個樣品確實存在顯著差異的證據(jù)，并告知打算得到哪個樣品中被上調(diào)或下調(diào)的基因。如果同時想知道上調(diào)和下調(diào)的基因，則相當于兩個服務(wù)，價格加倍。
實驗結(jié)束后我們會提供篩選到的含有差異基因的質(zhì)粒，用兩個樣品制備的cDNA制備的探針對篩選到的差異克隆進行Southern鑒定的圖片一幅，以及簡明實驗步驟。