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  • UNG酶(尿嘧啶DNA糖基化酶)
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經(jīng)銷商

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889

產(chǎn)地

上海市

更新時間

2017/7/12 12:35:35

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產(chǎn)品簡介

UNG酶用途

因PCR是一種極敏感的擴(kuò)增技術(shù),易受污染的影響。小量的外源 DNA 污染可以與目的模板一塊被擴(kuò)增。當(dāng)前一次擴(kuò)增產(chǎn)物用來進(jìn)行新的擴(kuò)增反應(yīng)時,會發(fā)生共同來源的污染,這稱之為殘余污染;從其他樣品中純化的 DNA 或克隆的 DNA 也會是污染源。衛(wèi)生部已經(jīng)明確規(guī)定,凡是用于臨床檢驗的PCR試劑,都應(yīng)該有 UNG酶技術(shù),以防止污染

UNG酶(尿嘧啶DNA糖基化酶)詳細(xì)信息

控制污染的方法主要有兩種:

1 、在 PCR 實驗過程中使用良好的實驗步驟和實驗環(huán)境減少殘余污染:使用抗氣霧劑移液管的阻止氣霧劑進(jìn)入 eppendorf 管內(nèi);為 PCR 樣品配制和擴(kuò)增后分析設(shè)計隔離的區(qū)域;在準(zhǔn)備新反應(yīng)前更換手套;總是使用不含有模板的陰性對照檢測污染;使用預(yù)先混合的反應(yīng)成分,而不是每個反應(yīng)的每個試劑單獨加入。

•  使用尿嘧啶DNA糖基化酶(UDG酶),這種酶(也稱為尿嘧啶 -N- 糖基化酶或UNG酶)移除 DNA 中的尿嘧啶,在 PCR 反應(yīng)液配制時,將dUTP和dTTP 按一定的比例混用,使得擴(kuò)增產(chǎn)物含有脫氧尿嘧啶,這種產(chǎn)物對 UNG 敏感,所有可以在 PCR 前對新配制的反應(yīng)用 UNG 處理以破壞殘余產(chǎn)物,杜絕污染。

UNG酶特征

•  克隆有 Thermu aquaticus DNA Polymerase 基因的大腸桿菌經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)后,再經(jīng)三次過柱純化分離出來的重組蛋白。

•  50ul 體系中,加入 0.1U 的 UNG 酶,能夠消除 10 7 帶有 dUTP 的、大于 6 個堿基的雙鏈 DNA 污染。

•  反應(yīng)條件: 37 ℃ , 2 分鐘;反應(yīng) buffer: 20mM Tris-HCl(PH:8.0); 1mM EDTA; 1mM DTT 。

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