無內(nèi)毒素質(zhì)粒大提試劑盒
EndoFree Plasmid Maxi Kit
（產(chǎn)品咨詢：/：）
簡介：
純化得到至多500 μg無內(nèi)毒素高轉(zhuǎn)染級純質(zhì)粒或柯斯質(zhì)粒DNA
1.純化得到的DNA內(nèi)毒素低于0.1 EU/µg
2.純化流程快，同時去除內(nèi)毒素
3.獲得高產(chǎn)量的高拷貝質(zhì)粒DNA
4.使用LyseBlue，獲得*的裂解和高產(chǎn)量的DNA
EndoFree Plasmid Kits基于陰離子交換技術，可快速制備不含內(nèi)毒素的質(zhì)粒DNA。QIAfilter Cartridges通過過濾快速澄清裂解液，DNA產(chǎn)量至多500 μg（Maxi）、2.5 mg（Mega）和10 mg（Giga）。制備的DNA純度超過兩次CsCl梯度離心法所得DNA的純度，非常適合超轉(zhuǎn)染級純的應用。
詳細信息：
性能
EndoFree Plasmid Maxi Kit將高效的內(nèi)毒素去除步驟整合到質(zhì)粒純化過程中，不需要額外步驟，也不需用親和柱去除脂多糖。通過QIAfilter Maxi Cartridge過濾細菌裂解液，通過重力流QIAGEN-tip 500陰離子交換柱純化質(zhì)粒DNA。100–250 ml培養(yǎng)菌液至多可純化500 µg DNA。（培養(yǎng)量取決于質(zhì)?？截悢?shù)量、插入片段大小、宿主菌和培養(yǎng)介質(zhì)。）純化的DNA無內(nèi)毒素（<0.1 EU/µg DNA）。
EndoFree Plasmid Kits去除細菌在裂解過程中釋放的內(nèi)毒素，內(nèi)毒素會影響原代細胞和敏感培養(yǎng)細胞的DNA轉(zhuǎn)染。從EndoFree Plasmid Kits得到的無內(nèi)毒素DNA高度適用于可重復且結(jié)果可靠的轉(zhuǎn)染。QIAGEN超純無內(nèi)毒素DNA也適用于基因治療研究和其他敏感應用。
質(zhì)粒制備中的內(nèi)毒素水平*
質(zhì)粒準備方法 | 內(nèi)毒素(EU†/µg DNA) | 平均轉(zhuǎn)染效率‡ |
EndoFree Plasmid Kit | 0.1 | 154% |
QIAGEN Plasmid Kit | 9.3 | 100% |
2x CsCl | 2.6 | 99% |
Silica-gel slurry | 1230.0 | 24% |
* 宿主菌：大腸桿菌DH5α 質(zhì)粒：pRSVcat.
† 1 ng LPS = 1.8 EU.
‡ 根據(jù)表中數(shù)據(jù)計算
無內(nèi)毒素DNA配合原代細胞得到高轉(zhuǎn)染率*
DNA純化方法 | 轉(zhuǎn)染細胞百分比 |
EndoFree Plasmid Kit | 21.0% ± 0.93 |
QIAGEN Plasmid Kit | 8.1% ± 0.57 |
Silica-gel slurry | 5.2% ± 0.74 |
* 原代兔胃壁細胞轉(zhuǎn)染pEGFP-N2（CLONTECH），pEGFP-N2由所示的方法制備。使用Effectene Transfection Reagent進行轉(zhuǎn)染。該數(shù)據(jù)是細胞表達GFP的百分率，由轉(zhuǎn)染48小時后綠色熒光細胞數(shù)量確定。轉(zhuǎn)染效率是每種純化方法制備的超過2個不同的DNA中6–9個復制樣本的平均值。（數(shù)據(jù)由C. Chew and J. Parente友情提供， Department of Molecular Medicine and Genetics, Medical College of Georgia, Augusta, Georgia, USA.）
原理
純化的質(zhì)粒DNA內(nèi)毒素污染水平取決于所用的純化方法（參見"Endotoxin levels in plasmid preparations"）。硅膠技術純化的DNA具有非常高的內(nèi)毒素水平。QIAGEN、QIAfilter、HiSpeed Plasmid Kits和兩次CsCl超速離心可獲得相對低水平內(nèi)毒素的純DNA。EndoFree Plasmid Buffer Set包含完整的內(nèi)毒素去除步驟，獲得<0.1 EU/µg的質(zhì)粒DNA。廣州健侖生物科技有限公司
QIAfilter、HiSpeed和EndoFree Plasmid Kits提供的QIAfilter Cartridges是特殊設計的過濾裝置，用于代替細菌細胞堿裂解后的離心步驟。QIAfilter Cartridges可*去除SDS沉淀，清除細菌裂解液，相比離心可大量節(jié)約時間，減少1小時的質(zhì)粒純化時間。QIAfilter Maxi Cartridges在幾秒鐘內(nèi)，推動液體通過過濾器，以注射的方式將裂解物清除。廣州健侖生物科技有限公司
QIAGEN-tips中*的陰離子交換樹脂（不提供EndoFree Plasmid Buffer Set）專為核酸純化而開發(fā)。它的分離性能使得DNA純度與連續(xù)兩次CsCl梯度離心獲得的DNA純度相當。由重力流驅(qū)動并持續(xù)運轉(zhuǎn)的預裝QIAGEN-tips，zui大限度減少手動制備質(zhì)粒所需的時間。整個QIAGEN質(zhì)粒純化系統(tǒng)不使用有毒物質(zhì)，如苯酚，氯仿，溴化乙錠和CsCl，zui大限度地減少對用戶和環(huán)境的危害。
內(nèi)毒素，又稱脂多糖或LPS，是革蘭氏陰性菌細胞膜的組成部分，如大腸桿菌。內(nèi)毒素在質(zhì)粒解裂純化過程中釋放，并顯著地降低內(nèi)毒素敏感的細胞株轉(zhuǎn)染效率。此外，內(nèi)毒素與DNA競爭“自由”轉(zhuǎn)染試劑，影響轉(zhuǎn)染實驗。內(nèi)毒素也誘導巨噬細胞和B細胞等免疫細胞中非特異性免疫反應，從而導致轉(zhuǎn)染結(jié)果的誤讀。這些反應包括誘導的蛋白質(zhì)和脂類，如IL-1和前列腺素的合成?？傮w而言，內(nèi)毒素在轉(zhuǎn)染實驗裝置中是不可控變量，影響結(jié)果的可重復性，使它們難以對比、解讀。在基因治療研究中，內(nèi)毒素可造成內(nèi)毒素休克綜合癥和激活補體級聯(lián)，干擾研究。廣州健侖生物科技有限公司 產(chǎn)品咨詢：/
操作流程
在堿性條件下，細菌細胞裂解，用QIAfilter Cartridge清除粗裂解物。將Endotoxin Removal Buffer加入到過濾后的裂解液中。冰浴后，將純凈的裂解物上樣到陰離子交換柱上，在適當?shù)牡望}和pH條件下，質(zhì)粒DNA選擇性結(jié)合。用中鹽緩沖液清除RNA、蛋白質(zhì)、代謝產(chǎn)物和其他低分子量雜質(zhì)，超純質(zhì)粒DNA被高鹽緩沖液洗脫。DNA由異丙醇脫鹽、沉淀并且離心回收。
應用
使用EndoFree Plasmid Kits純化的DNA適合多種敏感應用，包括：
1.轉(zhuǎn)染，包括原代、敏感以及懸浮細胞
2.基因治療研究
3.基因沉默
4.顯微注射
技術參數(shù)：
特點 | 參數(shù) |
|---|---|
Applications | Transfection, gene therapy |
Culture volume/starting material | 100 µl – 250 ml culture volume |
Plasmid type | High-copy, low-copy, cosmid DNA |
Processing | Manual (vacuum) |
Samples per run; throughput | 1 sample per run |
Technology | Anion-exchange technology |
Time per run or prep per run | 150 min |
Yield | <500 µg |
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