石蠟DNA，RNA同時提取試劑盒

AllPrep DNA/RNA FFPE Kit

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簡介：

從福爾馬林固定、石蠟包埋的組織切片中同時純化基因組DNA和總RNA（包括小RNAs）

1．使用小樣本量即可獲得大量純化產(chǎn)物

2．在純化同時，保持DNA和RNA的完整性

3．高效分離RNA和DNA

4．對同一FFPE樣本進(jìn)行全面的DNA和RNA分析

如要對基因組學(xué)和轉(zhuǎn)錄組學(xué)數(shù)據(jù)進(jìn)行可靠比較，則需從同一樣本中純化DNA和RNA。AllPrep DNA/RNA FFPE Kit使用優(yōu)良的溶解方法，從福爾馬林固定、石蠟包埋的組織樣本中純化DNA和RNA。純化產(chǎn)物適用于real-time PCR和焦磷酸測序等應(yīng)用。

詳細(xì)信息：

性能

使用AllPrep DNA/RNA FFPE Kit純化的DNA和RNA的質(zhì)量與使用QIAamp FFPE Tissue Kit和RNeasy FFPE Kit/miRNeasy FFPE Kit純化的產(chǎn)物的質(zhì)量相當(dāng)。因此，純化產(chǎn)物可用于焦磷酸測序、real-time PCR和RT-PCR等下游應(yīng)用。

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原理

AllPrep DNA/RNA FFPE Kit專為從FFPE樣本中同時純化基因組DNA和總RNA而設(shè)計。該試劑盒可使用同一樣本純化DNA和RNA，而非像其他純化方法那樣，需將樣本分為兩份再分別進(jìn)行純化操作。如將樣本分為兩份分別純化DNA和RNA，其純化出的DNA和RNA來自不同的細(xì)胞群落，可能具有不同性質(zhì)特征。從同一樣本中同時純化DNA和RNA可減少浪費，因為FFPE樣本是十分珍貴的樣本，通常很難恢復(fù)且樣本量少。

由于固定和包埋，F(xiàn)FPE樣本中的核酸通常都嚴(yán)重片段化，核酸的分子量通常小于從新鮮或冷凍樣本中分離出的核酸的分子量。從同一FFPE樣本中分離DNA和RNA面臨著很大困難：片段化的DNA長度短，且部分是單鏈結(jié)構(gòu)；因此其更像RNA，而非完整的DNA。片段化DNA這一特性使得用物理方法分離DNA和RNA十分困難。AllPrep DNA/RNA FFPE Kit使用優(yōu)良的溶解方法，從同一個FFPE樣本中分別釋放DNA和RNA。

盡管標(biāo)準(zhǔn)的質(zhì)量控制分析（如凝膠電泳或芯片分析方法）無法檢測到甲醛的化學(xué)修飾，但其對酶分析有嚴(yán)重干擾。AllPrep DNA/RNA FFPE Kit已經(jīng)過優(yōu)化，可zui大程度上逆轉(zhuǎn)甲醛化學(xué)修飾，而不引起DNA和RNA的進(jìn)一步降解。

操作流程

簡單的流程可從同一個樣本中純化高品質(zhì)DNA和RNA。AllPrep DNA/RNA FFPE Kit使用優(yōu)良的溶解方法，從同一個FFPE樣本中分別釋放DNA和RNA。使用這種方法時，F(xiàn)FPE樣本要在優(yōu)化的裂解緩沖液中孵育，使得RNA釋放出來，而DNA形成沉淀。離心后，將含有RNA的上清和含有DNA的沉淀分別處理，純化RNA和DNA。再次進(jìn)行孵育有一定的解交聯(lián)作用，然后使用RNeasy MinElute或QIAamp MinElute離心柱純化RNA和DNA。用柱上DNA酶處理純化的RNA，以有效去除DNA污染。根據(jù)RNA與離心柱的結(jié)合情況，純化的RNA中可能含有也可能不含miRNA等小RNAs。對于純化后的DNA，可選擇性進(jìn)行柱上RNA酶消化，因為在離心前的DNA和RNA分離步驟中RNA污染水平已達(dá)到zui低。

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應(yīng)用

盡管AllPrep DNA/RNA FFPE Kit已經(jīng)過優(yōu)化，可zui大程度上逆轉(zhuǎn)福爾馬林化學(xué)修飾，而不引起DNA和RNA的進(jìn)一步降解；但從FFPE樣本中純化獲得的核酸不應(yīng)該用于需要大分子量DNA或完整長度RNA的下游應(yīng)用。一些應(yīng)用可能需要進(jìn)行化學(xué)修飾后，再使用片段化核酸（如：設(shè)計PCR和RT-PCR的小擴(kuò)增子）。在cDNA合成中，應(yīng)使用基因特異性引物，而非oligo-dT引物。如果無法使用基因特異性引物，則可使用任意引物。

技術(shù)參數(shù)：

【公司名稱】 廣州健侖生物科技有限公司

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【聯(lián) 系 人】全國東

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【騰訊 】

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