大鼠抗心磷脂抗體IgG(ACA-IgG)ELISA試劑盒實驗使用說明書

　　BS-3236大鼠抗心磷脂抗體IgG(ACA-IgG)ELISA試劑盒

　　一、實驗原理

　　本試劑盒采用雙抗體夾心法檢測大鼠血清/血漿中的ACA-IgG抗體。微孔板預包被大鼠ACA-IgG抗體，依次加入樣本、酶標二抗，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物。經(jīng)TMB顯色后，450nm波長下測定吸光度(OD值)，與標準曲線對比計算濃度。

　　二、試劑組成

　　組分規(guī)格與特性

　　預包被微孔板96孔/板，包被純化大鼠ACA-IgG抗體

　　標準品6個濃度梯度(含最高濃度20μg/mL)，含NaN3防腐劑

　　酶標二抗HRP標記抗ACA-IgG抗體，含0.02%硫柳汞

　　TMB顯色液含ABTS或TMB底物，避光保存

　　終止液0.25M草酸或2M H2SO4

　　洗滌液20倍濃縮PBS，含0.1%疊氮鈉

　　三、操作步驟

　　樣本準備

　　血清/血漿樣本需離心(3000g×10min)去除顆粒物，避免溶血。

　　使用前用樣本稀釋液(含10%小牛血清的PBS)按1:10稀釋。

　　加樣與孵育

　　每孔加入100μL標準品/樣本，陰性/陽性對照設復孔。

　　37℃振蕩孵育30min，避免蒸發(fā)(濕度>60%)。

　　洗滌

　　機洗5次，每次300μL洗滌液，靜置30s后拍干。

　　顯色與檢測

　　每孔加100μL酶標二抗，37℃孵育30min后重復洗滌。

　　加入TMB顯色液避光反應15min，終止液終止反應。

　　450nm讀取OD值，繪制標準曲線計算樣本濃度。

　　四、注意事項

　　有效期：試劑盒2-8℃保存，有效期10-18個月(避免凍結(jié)) 。

　　交叉污染：不同批號試劑不可混用，加樣需更換槍頭。

　　環(huán)境控制：室溫平衡試劑30min，避免強光照射顯色液。

　　結(jié)果異常：若空白孔OD值>0.15，可能洗滌不或試劑污染。

　　五、性能參數(shù)

　　靈敏度：檢測限≤0.5μg/mL。

　　線性范圍：標準曲線R2≥0.99。

　　重復性：批內(nèi)/批間CV均<15%。

　　注：以上僅供參考，不作為實際數(shù)據(jù)!

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