人瘦素(LEP)ELISA試劑盒使用說(shuō)明書
BS-0083人瘦素(LEP)ELISA試劑盒
以下是綜合多個(gè)高可信度來(lái)源整理的人瘦素(LEP)ELISA試劑盒使用說(shuō)明書，涵蓋實(shí)驗(yàn)原理、操作步驟及關(guān)鍵注意事項(xiàng)：
一、實(shí)驗(yàn)原理
采用雙抗體夾心法酶聯(lián)吸附試驗(yàn)(ELISA)。純化的抗LEP抗體包被微孔板，依次加入標(biāo)準(zhǔn)品/樣本、生物素標(biāo)記抗體及HRP標(biāo)記親和素，形成復(fù)合物。TMB顯色后，顏色深淺與瘦素濃度呈正相關(guān)，通過(guò)450nm波長(zhǎng)測(cè)定OD值計(jì)算濃度。
二、試劑盒組成
組分 規(guī)格/說(shuō)明 保存條件
預(yù)包被微孔板 96孔 2-8℃
標(biāo)準(zhǔn)品 凍干粉(濃度梯度0.15-50ng/mL) -20℃
生物素標(biāo)記抗體 100μL(1:100稀釋) 2-8℃
HRP標(biāo)記親和素 100μL(1:100稀釋) 2-8℃
顯色劑A/B液 各6mL 避光2-8℃
終止液 6mL(2N H?SO?) 2-8℃
20×洗滌緩沖液 20mL 室溫(結(jié)晶需水浴溶解)
三、樣本處理
血清/血漿
室溫凝固10-20分鐘后離心(2000-3000×g，20分鐘)，避免溶血。
血漿需EDTA/肝素抗凝，離心后取上清。
組織勻漿
按1:9(w/v)加入PBS勻漿，離心取上清。
細(xì)胞上清
直接離心(2000×g，10分鐘)去除顆粒。
保存條件：-20℃分裝凍存，避免反復(fù)凍融。
四、操作步驟
試劑平衡：從冰箱取出后室溫平衡20分鐘。
加樣
標(biāo)準(zhǔn)品孔：加入50μL梯度稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品。
樣本孔：加入10μL樣本+40μL樣本稀釋液。
溫育
37℃孵育60分鐘，洗滌后加入生物素抗體，再孵育30分鐘。
顯色與終止
TMB顯色15分鐘，加終止液后15分鐘內(nèi)測(cè)OD值。
五、關(guān)鍵注意事項(xiàng)
洗滌：手工洗板需拍干，自動(dòng)洗板機(jī)每孔加350μL洗滌液。
顯色控制：避免顯色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)導(dǎo)致背景升高。
儀器校準(zhǔn)：使用前確認(rèn)酶標(biāo)儀波長(zhǎng)準(zhǔn)確性。
六、結(jié)果計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)、OD值為縱坐標(biāo)繪制曲線，樣本濃度通過(guò)曲線方程計(jì)算。若樣本OD值超出范圍，需用稀釋液稀釋后重測(cè)。
注：以上資料僅供參考，本試劑盒僅用于科研，不可用于臨床診斷。
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