小鼠肌糖原(MG)ELISA試劑盒科研說明書

　　小鼠肌糖原(MG)ELISA試劑盒?是一種用于體外定量檢測小鼠血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中肌糖原含量的科研工具，采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)原理。

　　實(shí)驗(yàn)原理

　　試劑盒通過預(yù)先包被的小鼠肌糖原(MG)捕獲抗體，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品和HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)溫育后洗滌，使用TMB底物顯色。顏色深淺與樣品中肌糖原含量呈正相關(guān)，最終在450nm波長下測定吸光度(OD值)并計(jì)算濃度。

　　樣本處理及要求

　　血清?：全血標(biāo)本室溫放置2小時(shí)或4℃過夜，1000×g離心20分鐘，取上清檢測或-20℃/-80℃保存(避免反復(fù)凍融)。

　　血漿?：使用EDTA或肝素抗凝，采集后30分鐘內(nèi)2-8℃、1000×g離心15分鐘，取上清。

　　組織勻漿?：用預(yù)冷PBS沖洗組織，稱重后按1:9比例加入PBS(推薦含蛋白酶抑制劑)，冰上研磨，可進(jìn)行超聲破碎或反復(fù)凍融，5000×g離心5~10分鐘取上清。

　　細(xì)胞培養(yǎng)上清?：1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測。

　　試劑盒組成(96孔配置)

　　名稱 配置

　　微孔酶標(biāo)板 8孔×12條

　　標(biāo)準(zhǔn)品 0.3 mL × 6管(濃度：480、240、120、60、30、15 ng/mL)

　　樣本稀釋液 6 mL

　　檢測抗體-HRP 10 mL

　　20×洗滌緩沖液 25 mL

　　底物A 6 mL

　　底物B 6 mL

　　終止液 6 mL

　　封板膜 2張

　　說明書 1份

　　自封袋 1個(gè)

　　操作步驟簡要

　　試劑與樣本平衡至室溫(20–25℃)。

　　設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，加入50μL標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣本。

　　每孔加入HRP標(biāo)記檢測抗體100μL，封板后37℃溫育60分鐘。

　　洗板5次，拍干。

　　每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15分鐘。

　　加入終止液50μL終止反應(yīng)。

　　15分鐘內(nèi)于450nm測定OD值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算濃度。

　　注意事項(xiàng)

　　所有試劑使用前需平衡至室溫。

　　洗滌需凈，防止交叉污染。

　　底物避光保存，變藍(lán)則不可使用。

　　避免標(biāo)本溶血，以免影響結(jié)果。

　　不同批號(hào)試劑勿混用。

　　注：本公司產(chǎn)品供科研實(shí)驗(yàn)，以上供參考!

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