人γ干擾素（IFN-γ）ELISA試劑盒使用說明書

　人γ干擾素（IFN-γ）ELISA試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中人γ干擾素的含量?，其核心原理為雙抗體夾心法，通過酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值）并計算濃度。

　實驗原理

　試劑盒采用?雙抗體夾心法?：預(yù)先包被抗人IFN-γ捕獲抗體的微孔板，依次加入樣本或標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體，形成“抗體~抗原~酶標(biāo)抗體”復(fù)合物。經(jīng)洗滌后加入TMB底物顯色，顏色深淺與樣本中IFN-γ濃度呈正相關(guān)，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算結(jié)果。

　樣本處理要求

　樣本類型處理方法

　血清?室溫凝固10–20分鐘，2000–3000 rpm離心20分鐘，取上清；避免反復(fù)凍融

　血漿?使用EDTA或肝素抗凝，采集后30分鐘內(nèi)2–8℃離心15分鐘（1000×g），取上清

　組織勻漿?用預(yù)冷PBS沖洗組織，按1:9重量體積比加入含蛋白酶抑制劑的PBS，冰上研磨后5000×g離心5–10分鐘，取上清

　細(xì)胞上清?1000×g離心20分鐘，取上清檢測，避免溶血

　注意：溶血樣本會影響檢測結(jié)果，不建議使用。

　試劑盒組成（96孔配置）

　名稱配置保存條件

　微孔酶標(biāo)板12孔×8條2–8℃密封保存

　標(biāo)準(zhǔn)品0.3 mL×6管（濃度：800、400、200、100、50、25 pg/mL）-20℃保存

　樣本稀釋液6 mL2–8℃保存

　檢測抗體~HRP10 mL2–8℃避光

　20×洗滌緩沖液25 mL2–8℃保存

　底物A/B液各6 mL2–8℃避光

　終止液6 mL2–8℃保存

　封板膜&自封袋各2張/1個防潮保存

　操作步驟簡要

　加樣?：設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔，每孔加樣50μL。

　溫育?：37℃孵育30分鐘，封板防止蒸發(fā)。

　洗滌?：棄液后用洗滌液洗板5次，拍干。

　加酶?：每孔加HRP標(biāo)記抗體50μL（空白孔除外）。

　再次溫育與洗滌?：重復(fù)步驟2–3。

　顯色?：每孔加底物A、B液各50μL，37℃避光顯色15分鐘。

　終止?：每孔加終止液50μL，立即測定。

　測定?：以空白調(diào)零，450nm波長讀取OD值，15分鐘內(nèi)完成。

　性能參數(shù)

　靈敏度?：?0.30 pg/mL?

　標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍?：?7.81–500 pg/mL?

　樣本體積?：?50 μL?

　板間變異系數(shù)?：3.2%–6.0%

　板內(nèi)變異系數(shù)?：3.6%–4.4%

　平均回收率?：?0.92?（92%）

　注：不同品牌試劑盒參數(shù)略有差異，實際數(shù)據(jù)以隨貨說明書為準(zhǔn)。

　注意事項

　所有試劑使用前需平衡至室溫（20–25℃）。

　洗板要凈，防止殘留影響OD值。

　顯色液應(yīng)無色或淺色，變藍(lán)則失效。

　避免交叉污染，加樣時更換槍頭。

　注：本公司產(chǎn)品供科研實驗，以上供參考！

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