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HPLC法測(cè)定胃寧沖劑中丹參素的含量

來源:   2007年02月03日 15:11  
胃寧沖劑系由丹參、黨參等12味中藥用水煎煮提取濃縮制粒而成。成份復(fù)雜 ,而丹參是其主藥,主要活性成份為丹參素。本文采用HPLC法對(duì)丹參素的含量進(jìn)行測(cè)定,以 期能有效地控制胃寧沖劑的質(zhì)量。
1 儀器與設(shè)備
1.1 美國(guó)Waters液相色譜儀;Waters486紫外檢測(cè)器;DL-800色譜工作站。
1.2 丹參素鈉對(duì)照品(上海醫(yī)科大學(xué));甲醇、醋酸均為分析純。
1.3 胃寧沖劑樣品(江蘇蘇中制藥廠,批號(hào):970527,970528,970529) 。
2 色譜分析條件
  色譜柱Waters C18(3.9× 150mm);流動(dòng)相:甲醇-0.4%醋酸溶液(5∶95);檢測(cè)波長(zhǎng):281nm;柱溫:室溫;流速:1.2ml/mi n;按該條件測(cè)定樣品中的丹參素與其它相關(guān)成分能達(dá)到基線分離,理論板數(shù)為11600,,分離 度為4.1。經(jīng)多次實(shí)驗(yàn),當(dāng)理論板數(shù)為8000時(shí),丹參素仍能較好分離,規(guī)定理論板數(shù)應(yīng)不少 于8000。對(duì)照品及樣品色譜圖見圖1。
3 方法及結(jié)果
3.1  對(duì)照品丹參素鈉的純度測(cè)定:取丹參素鈉對(duì)照品約6mg,置100ml量瓶中加水至刻度,搖勻 ,依上述條件進(jìn)樣100μl,采樣時(shí)間為1h,以峰面積歸一化法計(jì)算,丹參素鈉的含量為99.61% 。



圖1 對(duì)照品色譜圖       樣品色譜圖
a-丹參素

3.2 對(duì)照品溶液的制備:取丹參素鈉對(duì)照品(約相當(dāng)于丹參素10mg), 精密稱定,置10ml量瓶中,加水溶解并稀釋至刻度,搖勻,作為對(duì)照品溶液。
3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備:分別精密吸取對(duì)照品溶液0.2,0.4,0.6,0.8,1.0和1.2ml置10ml量瓶中,加水稀釋至刻度,搖勻。依上述條件取10μl注入色譜儀,記錄色譜圖 ,以對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo),對(duì)照品峰面積積分值為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得回歸方程:Y=2.45X+1.163,r=0.9994。丹參素濃度在20~120μg/ml范圍內(nèi)峰面積積分值 與濃度呈良好的線性關(guān)系。
3.4 樣品的測(cè)定:取樣品約0.5g,精密稱定 ,置50ml量瓶中,加水適量,超聲處理30min,取出,放冷至室溫,用水稀釋至刻度,搖勻, 濾過,棄去初濾液,取續(xù)濾液作為供試品溶液。按上述條件取供試品溶液10μl進(jìn)行分析, 結(jié)果見表1。

表1 胃寧沖劑中丹參素的含量(n=3 )

批 號(hào)
含量(%)
RSD (%)

970527
0.232
0.83

970528
0.218
0.68

970529
0.281
1.24


3.5 穩(wěn)定性試驗(yàn):取樣品依本法進(jìn)行處理后,每間隔1h測(cè)定一次含量, 結(jié)果表明樣品中丹參素含量在24h內(nèi)幾乎沒有變化。
3.6 重現(xiàn)性試驗(yàn): 取同一批號(hào)樣品5份,分別依本法處理進(jìn)行測(cè)定,結(jié)果見表2。

表2 重現(xiàn)性試驗(yàn)結(jié)果

編 號(hào)
含量(%)
平均含量(%)
RSD( %)

1
0.231

2
0.223

3
0.226
0.225
1.59

4
0.222

5
0.224

3.7 回收率試驗(yàn):精密稱取已知含量的樣品適量,精密加入一定量的丹 參素對(duì)照品,依本法進(jìn)行含量測(cè)定并計(jì)算回收率,結(jié)果見表3。

表3 回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

樣品中丹參
素含量(mg)
加入丹參
素量(mg)
測(cè)得丹參
素量(mg)
回收率
(%)
平均回收率(%)
RSD
(%)

0.626
 
1.116
 100.90

0.634
 
1.094
98.20

0.587
 
1.057
99.06

0.652
0.480
1.144
101.06
100.54
1.56

0.645
 
1.149
102.13

0.598
 
1.098
101.86


4 討 論
4.1 丹參為處方中主藥成份,其水溶性有 效成份有丹參素,原兒茶醛,原兒茶酸等,據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道[1]丹參素含量較高,故選 擇測(cè)定丹參素含量,作為胃寧沖劑的含量指標(biāo)。丹參素的測(cè)定方法有紙層析紫外分 光光度法[2]、薄層掃描法[3]和液相色譜法[4,5]等,大多 測(cè)定的是藥材、單方制劑或兩味的復(fù)方制劑。胃寧沖劑成份復(fù)雜,有效成份分離比較困難, 選用本法可同時(shí)達(dá)到分離測(cè)定的目的。
4.2 由于丹參素鈉對(duì)照品的水 溶液不夠穩(wěn)定,為此,在測(cè)定過程中丹參素鈉對(duì)照品溶液應(yīng)臨用現(xiàn)配為好。

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