復(fù)方仙靈脾注射液是由淫羊藿、黃芪等中藥材組成，臨床上用于治療中風(fēng)后遺癥。黃芪甲苷為黃芪的主要有效成分。曾有報(bào)道用紫外分光光度法、薄層掃描法和液相色譜法測(cè)定淫羊藿制劑中黃芪甲苷的含量，但復(fù)方仙靈脾注射液中黃芪甲苷含量的測(cè)定方法筆者尚未見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)采用薄層掃描法對(duì)復(fù)方仙靈脾注射液中黃芪甲苷進(jìn)行了含量測(cè)定，該方法較好地排除了制劑中其他成分的干擾，具有簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確等特點(diǎn)，為控制該制劑的內(nèi)在質(zhì)量提供了可靠的依據(jù)。
1 儀器與試劑
CS-9301型雙波長(zhǎng)薄層掃描儀（島津）；硅膠G（青島海洋化工廠）；D101大孔吸附樹脂（天津制膠廠）；復(fù)方仙靈脾注射液（河南中醫(yī)學(xué)院一附院制劑室）；黃芪甲苷對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所）；所用試劑均為分析純。
2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果
2．1 對(duì)照品溶液的制備
精密稱取干燥恒重的黃芪甲苷對(duì)照品1.98mg，置2mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，濃度為0.99mg/mL。
2．2 供試品溶液的制備
用移液管精密吸取復(fù)方仙靈脾注射液5mL，置分液漏斗中，先用0.1mol/L NaOH飽和過的正丁醇萃取3次（10，15，20mL），將正丁醇層用正丁醇飽和過的0.1mol/L NaOH溶液洗滌3次（15，20，20mL），棄去堿液，正丁醇層置水浴上蒸干，殘?jiān)运?mL溶解，置于已處理好的大孔吸附樹脂柱上，依次用蒸餾水、40％乙醇、50％乙醇適量進(jìn)行洗脫。收集50％乙醇洗脫液，蒸干，用少量甲醇溶解，移至5mL量瓶中，用甲醇定容至刻度。
2．3 陰性對(duì)照液的制備
按處方比例稱取除黃芪以外其他藥材，按照復(fù)方仙靈脾注射液的工藝進(jìn)行制備，得陰性對(duì)照樣品，吸取陰性對(duì)照樣品5mL，按“2．2”項(xiàng)下方法，得陰性對(duì)照液。
2．4 薄層色譜條件
吸附劑：硅膠G-0．5％CMC-Na（3：1）攪拌均勻后，涂布于（10cm×20cm）玻璃板上，厚度為0.5mm，晾干后于105℃活化1h，置干燥器中備用。展開劑：氯仿．甲醇-水（13：7：2）下層液。展開方式為上行，展距為10cm（展開前先飽和30min）。展開后取出薄層板，晾干，以10％硫酸乙醇溶液為顯色劑進(jìn)行顯色，于105℃烘至斑點(diǎn)清晰。紫外365nm定位。
2．5 薄層掃描條件
采用反射法單波長(zhǎng)鋸齒掃描法，狹縫為1.2mm×1.2mm，線性參數(shù)SX=3，掃描寬度為14mm，靈敏度為中等，掃描波長(zhǎng)為λs=500nm，λR=700nm。
2．6 線性范圍
分別吸取上述對(duì)照品溶液2.0，4.0，6.0，8.0，10.00μL，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，按“2．5”項(xiàng)下的方法進(jìn)行掃描測(cè)定。以斑點(diǎn)峰面積積分值為縱坐標(biāo)，以黃芪甲苷對(duì)照品點(diǎn)樣量為橫坐標(biāo)作圖，得一不通過原點(diǎn)的直線，其回歸方程式為：Y=151.32X+81.38，相關(guān)系數(shù)r=0.9998。結(jié)果表明，黃芪甲苷對(duì)照品點(diǎn)樣量在1.98～9.90μg 之間，與其峰面積值呈線性關(guān)系。
2．7 陰性對(duì)照實(shí)驗(yàn)
在供試品的色譜中，與黃芪甲苷對(duì)照品色譜的相應(yīng)位置上，顯相同的桔黃色熒光斑點(diǎn)，在陰性對(duì)照液的相應(yīng)位置上，無此斑點(diǎn)。
2．8 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)
在同一薄層板上，點(diǎn)對(duì)照品溶液4μL，薄層色譜后，分別于30，60，90，120 min時(shí)進(jìn)行掃描測(cè)定，斑點(diǎn)峰面積積分值分別為1265.35，1240.58，1237.79，1232.23。結(jié)果表明，在2h內(nèi)斑點(diǎn)穩(wěn)定，RSD為1．18％。
2．9 精密度實(shí)驗(yàn)
吸取供試品溶液4μL，點(diǎn)相同濃度的5個(gè)點(diǎn)于同一薄層板上，斑點(diǎn)峰面積積分值的平均值為1 327.61，RSD為1.60％。
2．10 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)
吸取供試品溶液10μL，對(duì)照品溶液4μL，分別點(diǎn)于同一薄層板上，進(jìn)行掃描測(cè)定，再同法測(cè)定4次，復(fù)方仙靈脾注射液中黃芪甲苷的含量（mg/mL）分別為0.052，0.052，0.050，0.051，0.049，平均值為0.051mg/mL，RSD為2.57％。
2．11 回收率實(shí)驗(yàn)
精密量取復(fù)方仙靈脾注射液5mL，加入0.5mg的對(duì)照品，進(jìn)行掃描測(cè)定，計(jì)算回收率，平均回收率為99.44％，RSD
為1.48％，n=5
2．12 供試品的含量測(cè)定
精密吸取供試品溶液10μL，對(duì)照品溶液2，4μL，交叉點(diǎn)樣于同一薄層板上，進(jìn)行掃描測(cè)定。
3 討論
3．1 由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，在處理樣品時(shí)，用水、40％乙醇、50％乙醇從大孔吸附樹脂色譜柱中洗脫，并取50％乙醇的洗脫液，可以排除制劑中其他成分的干擾。
3．2 通過將薄層板橫放點(diǎn)樣，并且在展開前預(yù)飽和30min，不僅能避免邊緣效應(yīng)對(duì)薄層色譜圖譜的不良影響，還會(huì)使斑點(diǎn)更集中。
3．3 實(shí)驗(yàn)表明，采用薄層掃描法測(cè)定復(fù)方仙靈脾注射液中黃芪甲苷的含量，操作較為簡(jiǎn)單，重現(xiàn)性好，靈敏可靠，可以作為控制該制劑質(zhì)量的依據(jù)之一。
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