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高通量細胞計數(shù)儀是如何工作的？

來源：廣州市艾貝泰生物科技有限公司 2022年12月19日 16:42

　　高通量細胞計數(shù)儀可以提供快速、簡便和準確的細胞計數(shù)和存活率計數(shù)，無需使用血球計數(shù)器，克服了手工計數(shù)的繁瑣和主觀性，節(jié)約實驗時間，并能減少主觀判斷，避免產(chǎn)生錯誤。原理：臺盼藍排斥法。正常的活細胞，胞膜結(jié)構(gòu)完整，能夠排斥臺盼藍，使之不能夠進入胞內(nèi)；而喪失活性或細胞膜不完整的細胞，胞膜的通透性增加，可被臺盼藍染成藍色。自動細胞計數(shù)儀應(yīng)用臺盼藍染色法，再結(jié)合CCD成像，快速準確完成細胞計數(shù)和存活率計數(shù)。

　　高通量細胞計數(shù)儀是如何工作的？

　　開始使用流式細胞儀，準備要分析的樣品。從細胞培養(yǎng)物，血液或分解的組織中獲得的細胞應(yīng)制成懸浮液。將該細胞懸浮液分成數(shù)個試管進行染色，保留未染色細胞作為對照。通過添加標記有熒光探針的抗體或染色細胞成分的染料對其他細胞樣品染色。分析細胞內(nèi)蛋白質(zhì)時，先將細胞固定(使用福爾馬林緩沖液)并進行透化(使用透化劑)，以使抗體和染料進入細胞。細胞與抗體或染料孵育后，將細胞在緩沖液中洗滌，然后重懸在基于鹽的緩沖液中進行分析。然后將準備好的樣品引入流式細胞儀。

　　三個主要輸出測量值是前向散射，側(cè)向散射和熒光信號。激光的可見光會反射出每個流通池，從而提供流通的尺寸和形狀特征。前向散射的前向散射(FSC)是從正方向來的散射而反射細胞的大小。沿著激光路徑測量散射，每個單元將使光圍繞單元的側(cè)面彎曲，從而引起衍射。因此，F(xiàn)SC的強度反映了細胞的直徑。

　　側(cè)面散射。該側(cè)向散射(SSC)是在90度激光束下測量的散射，反映了細胞的粒度或復(fù)雜性。細胞中的結(jié)構(gòu)將改變進入細胞的光波的方向，從而導(dǎo)致特定的細胞結(jié)構(gòu)(例如顆粒和細胞核)折射光。SSC越強，折射越大，則預(yù)期單元中的粒度就越大。

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