PCR實驗室"又叫基因擴增實驗室,是核酸檢測采樣標(biāo)本的最后目的地,核酸檢測采集的咽拭子標(biāo)本會被送到這里,在這里經(jīng)過滅活、提取、擴增,最終檢驗出其陰性或陽性。
鑫貝西小科普?
PCR是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction)的簡稱。是一種分子生物學(xué)技術(shù),通過DNA基因追蹤系統(tǒng),能迅速掌握患者體內(nèi)的病毒含量,其精確度高達(dá)納米級別,精確檢測乙肝病毒在患者體內(nèi)存在的數(shù)量、是否復(fù)制、是否傳染、傳染性有多強、是否必要服藥、判斷藥物療效如何、給臨床治療提供了可靠的檢驗依據(jù)。
由于該檢測方法可以測出普通檢驗難以檢測出的病毒,并具有靈敏度高、特異性高、快捷、對樣品要求低等優(yōu)點,因此被臨床醫(yī)生廣為認(rèn)可,已廣泛應(yīng)用于醫(yī)院的臨床診斷和各防疫檢測部門的禽疫病診斷。但是,這種實驗需要有能保證絕對安全、配置合理的實驗室和非常規(guī)范的操作為前提。近年來對臨床基因擴增檢驗實驗室的建設(shè)越來越得到重視,因為它對檢測結(jié)果的可靠性、準(zhǔn)確性和安全性起到至關(guān)重要的作用。
下面對PCR實驗室的平面布局、基本流程、污染防控簡單介紹:
PCR實驗室平面布局 普通PCR實驗室通常設(shè)置分為四個獨立的工作區(qū)域:試劑制備區(qū)、樣本制備區(qū)、核酸擴增區(qū)、產(chǎn)物分析區(qū)。 病毒檢測采用的熒光定量PCR檢測方法中定量PCR實驗室通常設(shè)置分為三個獨立的工作區(qū)域:試劑制備區(qū)、樣本制備區(qū)、核酸擴增和產(chǎn)物分析區(qū),即普通PCR實驗室后兩個區(qū)合并。 為避免交叉污染,進(jìn)入各個工作區(qū)域必須嚴(yán)格遵循單一方向進(jìn)行,即只能從試劑制備區(qū)→樣本制備區(qū)→核酸擴增區(qū)→產(chǎn)物分析區(qū)。
定量PCR實驗基本流程
【試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)】
該實驗區(qū)主要進(jìn)行的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應(yīng)混合液的制備。試劑和用于標(biāo)本制作的材料應(yīng)直接運送至該區(qū),不得經(jīng)過其他區(qū)域。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi),并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的貯存試劑。
【標(biāo)本制備區(qū)】
該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為臨床標(biāo)本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴增反應(yīng)管和測定RNA時cDNA的合成。
【反應(yīng)混合物配制和擴增以及擴增產(chǎn)物分析區(qū)】
該區(qū)域主要進(jìn)行DNA或cDNA擴增和擴增片段的測定。此外,已制備的DNA模板和合成的cDNA(來自樣本制備區(qū))的加入和主反應(yīng)混合液(來自試劑貯存和制備區(qū))制備成反應(yīng)混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行。
污染的預(yù)防與控制
1、工作區(qū)域的嚴(yán)格劃分
(1)各個實驗區(qū)域設(shè)置合理;
(2)各個實驗區(qū)域要有明顯的標(biāo)記(如醒目的門牌或不同的地面顏色等),以避免各個不同實驗區(qū)域設(shè)備物品、試劑等發(fā)生混淆。
2、合理的系統(tǒng)設(shè)置
(1)合理的空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)置,盡量采用全送全排的空調(diào)系統(tǒng);
(2)嚴(yán)格的氣流壓力控制,保證不同的實驗區(qū)內(nèi)不同的壓力要求。
3、規(guī)范的操作
(1)臨床基因擴增檢驗實驗室的技術(shù)人員必須進(jìn)行上崗培訓(xùn),經(jīng)培訓(xùn)合格后才能從事臨床基因擴增檢驗的工作;
(2)在實驗操作過程中,操作者必須戴手套,并經(jīng)常更換。此外,操作中使用一次性帽子也是一個有效地防止污染的措施;
(3)清潔工作及時、正確。實驗工作結(jié)束后,必須立即對本區(qū)進(jìn)行清潔。除常規(guī)的消毒液體對表面進(jìn)行擦拭消毒或紫外線燈的照射消毒外,對一些實驗設(shè)備還應(yīng)進(jìn)行高壓消毒處理。
4、嚴(yán)格的管理
(1)嚴(yán)格控制進(jìn)出實驗室的人員。與實驗無關(guān)的人員不得隨意進(jìn)出實驗室,有條件的情況下要設(shè)置獨立的通道和進(jìn)出整個實驗區(qū)的門;
(2)在各個實驗區(qū)域使用帶有明顯區(qū)別標(biāo)志的工作服(如不同顏色),當(dāng)工作人員離開時不得將本區(qū)的工作服帶至其它區(qū)域;
(3)盡量減少在實驗區(qū)內(nèi)不必要的走動以減少交叉污染的可能性。
(4)擴增產(chǎn)物分析區(qū)是最主要的擴增產(chǎn)物污染來源,廢液不能在實驗室中傾倒,必須經(jīng)消毒液浸泡消毒后在遠(yuǎn)離實驗室的地方棄掉,用過的吸頭等一次性材料也應(yīng)經(jīng)消毒液浸泡消毒后統(tǒng)一處理,如焚燒等;
(5)擴增產(chǎn)物分析區(qū)可能會用到某些可致基因突變和有毒物質(zhì),應(yīng)特別注意實驗人員的安全防護(hù)。
5、完備的實驗室配套設(shè)施
完備的實驗室配套設(shè)施是保證實驗工作的必要條件,應(yīng)根據(jù)各個實驗室實驗內(nèi)容的不同配備相應(yīng)的設(shè)備和儀器,如超凈工作臺、離心機、加樣器等。
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