過(guò)敏反應(yīng)通常會(huì)引起許多皮膚癥狀，比如皮膚發(fā)紅、發(fā)癢，嚴(yán)重的患者還會(huì)出現(xiàn)刺痛或者面部出現(xiàn)紅斑、風(fēng)團(tuán)、丘疹或丘皰疹等癥狀。敏感性肌膚的人群選用化妝品時(shí)，需要特別關(guān)注化妝品的致敏性。通過(guò)斑馬魚技術(shù)可以有效評(píng)價(jià)化妝品及其原料的致敏性。

【評(píng)價(jià)原理】

過(guò)敏反應(yīng)的主要原因是過(guò)敏原/致敏因子誘導(dǎo)組織學(xué)上肥大細(xì)胞脫顆粒，釋放多種活性介質(zhì)進(jìn)而誘發(fā)各種過(guò)敏癥狀。其中類胰蛋白酶是肥大細(xì)胞內(nèi)預(yù)先合成的中性蛋白酶，是臨床上檢驗(yàn)人體是否過(guò)敏的重要指標(biāo)。斑馬魚產(chǎn)生過(guò)敏反應(yīng)時(shí)，同樣會(huì)誘導(dǎo)肥大細(xì)胞分泌類胰蛋白酶。因此，通過(guò)檢測(cè)斑馬魚整體類胰蛋白酶水平可以判斷化妝品及其原料的致敏性。

【實(shí)驗(yàn)方案】

我們將受測(cè)試斑馬魚分成若干組組，包含正常對(duì)照組和化妝品組。其中正常對(duì)照組未加入化妝品，化妝品組分別加入不同劑量（化妝品通過(guò)溶解到標(biāo)準(zhǔn)稀釋水中的方式添加到實(shí)驗(yàn)體系中）的樣品。

處理24 h后，利用酶標(biāo)儀檢測(cè)各組吸光度值（OD值），以類胰蛋白酶的表達(dá)水平評(píng)價(jià)化妝品致敏作用。

此外，可以通過(guò)斑馬魚病理切片，用PAS染色后觀察腸道壁上肥大細(xì)胞的狀況反映化妝品的致敏性。

【結(jié)果展示】（展示圖片僅供參考，實(shí)際實(shí)驗(yàn)組別依據(jù)合同而定）

圖1. 斑馬魚類胰蛋白酶含量（吸光度值）

與正常對(duì)照組比較，*p < 0.05，***p < 0.001

可以看到，化妝品中劑量和高劑量組類胰蛋白酶含量與正常對(duì)照組比較明顯升高，具有致敏性，低劑量組無(wú)致敏性。

圖2. 斑馬魚體內(nèi)肥大細(xì)胞染色典型圖（箭頭指示為肥大細(xì)胞）

從經(jīng)過(guò)PAS染色的病理切片中也能看出來(lái)，化妝品組斑馬魚的腸道壁上的肥大細(xì)胞與正常對(duì)照組相比數(shù)量明顯增加。

【評(píng)價(jià)結(jié)論】

1.經(jīng)過(guò)各組斑馬魚的對(duì)比實(shí)驗(yàn)，化妝品中、高劑量組斑馬魚類胰蛋白酶含量和腸道壁上的肥大細(xì)胞數(shù)量與正常對(duì)照組相比數(shù)量明顯增加。

2.本實(shí)驗(yàn)證實(shí)了該化妝品具有明顯的致敏作用。