斑馬魚(yú)模型實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)細(xì)胞凋亡【評(píng)價(jià)原理】

細(xì)胞都有一個(gè)固定死亡的程序，細(xì)胞凋亡通過(guò)去除潛在的損傷細(xì)胞和分化后多余的細(xì)胞來(lái)保護(hù)機(jī)體，在脊椎動(dòng)物中尤為重要。在斑馬魚(yú)DNA數(shù)據(jù)庫(kù)中已鑒定出許多與哺乳動(dòng)物同一家族的凋亡相關(guān)基因。這暗示了大部分凋亡通路在斑馬魚(yú)與高等脊椎動(dòng)物的進(jìn)化上有很高的保守性，因此，在凋亡的研究領(lǐng)域上，斑馬魚(yú)被認(rèn)為是一種有效的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型。

吖啶橙(AO)能透過(guò)胞膜完整的細(xì)胞，嵌入細(xì)胞核DNA，使之發(fā)出明亮的綠色熒光。凋亡的細(xì)胞呈現(xiàn)為染色增強(qiáng)，熒光更為明亮，均勻一致的圓狀或固縮狀、團(tuán)塊狀結(jié)構(gòu)。

基因組DNA斷裂時(shí)，暴露的3'-OH可以在末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶的催化下加上熒光素 (FITC) 標(biāo)記的dUTP (fluorescein-dUTP) ，從而可以通過(guò)熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)。

用兩種不同的特異性熒光染色，均可以在熒光顯微鏡下觀察到凋亡細(xì)胞。

斑馬魚(yú)模型實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)細(xì)胞凋亡【實(shí)驗(yàn)方案】

我們將受測(cè)試斑馬魚(yú)分成兩組，分別是正常對(duì)照組和供試品組。供試品通過(guò)服用的方式攝入到斑馬魚(yú)體內(nèi)（供試品通過(guò)溶解到養(yǎng)魚(yú)用水中的方式攝入到斑馬魚(yú)體內(nèi)）。

服用一段時(shí)間供試品后，我們分別對(duì)斑馬魚(yú)整體做兩種凋亡細(xì)胞特異性染色，用熒光顯微鏡觀察細(xì)胞凋亡。

【結(jié)果展示】

圖1. 斑馬魚(yú)凋亡表型圖（AO染色）

黃色虛線區(qū)域?yàn)樾呐K，綠色小點(diǎn)為凋亡細(xì)胞

可以看到，供試品組的凋亡細(xì)胞熒光強(qiáng)度與正常對(duì)照組比較明顯增強(qiáng)。

圖2. 斑馬魚(yú)凋亡表型圖（Tunnel染色）

紅色虛線區(qū)域?yàn)槠つw，紅色小點(diǎn)為凋亡細(xì)胞

可以看到，供試品組的凋亡細(xì)胞熒光強(qiáng)度與正常對(duì)照組比較明顯增強(qiáng)。

【評(píng)價(jià)結(jié)論】

1.經(jīng)過(guò)每組30尾斑馬魚(yú)的對(duì)比實(shí)驗(yàn)，供試品組斑馬魚(yú)出現(xiàn)凋亡細(xì)胞熒光強(qiáng)度比正常對(duì)照組明顯增強(qiáng)。

2.本實(shí)驗(yàn)證實(shí)了供試品誘發(fā)斑馬魚(yú)細(xì)胞凋亡。