斑馬魚模型評價(jià)抗血管內(nèi)皮損傷性血栓作用【評價(jià)原理】

普納替尼通過影響人血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移、血管形成等正常功能而造成血管內(nèi)皮損傷，從而引起血管堵塞，發(fā)生血栓。斑馬魚心血管系統(tǒng)在分子信號(hào)通路上與人和哺乳動(dòng)物的同源性達(dá)到85％以上，近年來斑馬魚廣泛地被用于心血管疾病研究領(lǐng)域，如心力衰竭、血栓、心律失常、心肌病、動(dòng)脈粥樣硬化等。

軀干出現(xiàn)血栓后，回心血量便會(huì)減少，血管直徑將會(huì)減小，血流速度降低，經(jīng)過血紅細(xì)胞特異性染色（呈紅色），患有血栓的斑馬魚心臟紅細(xì)胞比正常斑馬魚心臟紅細(xì)胞明顯減少，由于斑馬魚血液系統(tǒng)發(fā)育過程透明的特點(diǎn)，可以明顯被觀察到；利用血管熒光斑馬魚結(jié)合顯微鏡，可以明顯觀察到患有血栓的斑馬魚血管直徑減小；利用血流分析，可明顯觀察到患有血栓的斑馬魚血流速度減慢。

斑馬魚模型評價(jià)抗血管內(nèi)皮損傷性血栓作用【實(shí)驗(yàn)方案】

我們將受測試斑馬魚分成三組，分別是正常對照組、模型對照組和服用抗血栓藥物組。其中正常對照組未攝入普納替尼，模型對照組與服用抗血栓藥物組都攝入了等量的普納替尼（普納替尼通過溶解到養(yǎng)魚用水中的方式攝入到斑馬魚體內(nèi)）。服用抗血栓藥物組在加入普納替尼的同時(shí)攝入阿司匹林和二十五味珍珠片之類的抗血栓藥物。

服用一段時(shí)間抗血栓藥物后，（1）對斑馬魚整體做血紅細(xì)胞特異性染色，觀察血栓發(fā)生情況、心臟紅細(xì)胞信號(hào)強(qiáng)度變化；（2）在熒光顯微鏡下分析斑馬魚血管直徑變化；（3）在血流分析下觀察斑馬魚血流速度變化情況。

【結(jié)果展示】

圖1. 斑馬魚心臟紅細(xì)胞表型圖

黃色虛線區(qū)域?yàn)樾呐K，心臟內(nèi)紅色為紅細(xì)胞

可以看到，服用抗血栓藥物組的心臟紅細(xì)胞數(shù)量與模型對照組比較明顯增多。

圖2. 斑馬魚血管直徑表型圖

可以看到，服用抗血栓藥物組的血管直徑與未攝入普納替尼的正常對照組比較相似，未出現(xiàn)模型對照組血管直徑顯著減小的情況。

圖3. 斑馬魚血流速度

與模型對照組比較，*** p< 0.001

可以看到，服用抗血栓藥物組的血流速度與模型對照組比較，血流速度顯著加快。

【評價(jià)結(jié)論】

1.經(jīng)過每組30尾斑馬魚的對比實(shí)驗(yàn)，服用抗血栓藥物組的與模型對照組比較，心臟紅細(xì)胞明顯增多、血管直徑明顯增大、血流速度明顯加快。

2.本實(shí)驗(yàn)證實(shí)了a司匹林和er十五味珍珠片具有顯著的抗血栓作用。