利用斑馬魚(yú)模型評(píng)價(jià)老年癡呆防治作用【評(píng)價(jià)結(jié)論】
1.在氯化鋁誘導(dǎo)的老年癡呆模型中，服用多奈哌齊的斑馬魚(yú)反應(yīng)能力較模型對(duì)照組有明顯的改善，且對(duì)氯化鋁誘導(dǎo)的老年癡呆模型斑馬魚(yú)的乙酰膽堿酯酶活性也有顯著降低的作用。
2.在GSK-3β抑制劑篩選模型中，氯化鋰誘導(dǎo)斑馬魚(yú)出現(xiàn)無(wú)眼無(wú)腦模型，具有GSK-3β抑制作用。
3.在MAO抑制劑篩選模型中，司來(lái)吉蘭具有顯著抑制單胺氧化酶活性作用。

利用斑馬魚(yú)模型評(píng)價(jià)老年癡呆防治作用【評(píng)價(jià)原理】

由于斑馬魚(yú)大腦具有典型脊椎動(dòng)物腦部形態(tài)學(xué)特征，血管與神經(jīng)系統(tǒng)在分子信號(hào)通路上與人和哺乳動(dòng)物的同源性達(dá)到85%以上。GSK-3β是在進(jìn)化上高度保守的絲氨酸/蘇氨酸激酶，斑馬魚(yú)和人類表現(xiàn)出90%以上的序列相似性。單胺氧化酶（MAO）的核酸和氨基酸序列同大小鼠和人類MAO有67%～69%的同一性, 斑馬魚(yú)與人的MAO有著相同的外顯子-內(nèi)含子結(jié)構(gòu)。

1.氯化鋁誘導(dǎo)的老年癡呆模型

氯化鋁超過(guò)正常攝入量可導(dǎo)致動(dòng)物行為異常，同時(shí)破壞膽堿能神經(jīng)功能，還可增加淀粉樣蛋白的產(chǎn)量，終導(dǎo)致記憶力減退、學(xué)習(xí)能力降低。

通過(guò)行為分析儀檢測(cè)斑馬魚(yú)的對(duì)外界刺激的反應(yīng)能力，經(jīng)氯化鋁誘發(fā)的癡呆型斑馬魚(yú)反應(yīng)能力比正常對(duì)照組斑馬魚(yú)差；通過(guò)酶標(biāo)儀檢測(cè)斑馬魚(yú)的乙酰膽堿酯酶，經(jīng)氯化鋁誘發(fā)的老年癡呆斑馬魚(yú)乙酰膽堿酯酶活性高于正常斑馬魚(yú)。

2.GSK-3β抑制劑篩選模型

GSK-3β對(duì)APP的代謝過(guò)程、Tau蛋白的磷酸化過(guò)程以及神經(jīng)元凋亡機(jī)制均有影響。GSK-3β抑制劑有效降低Aβ以及Tau蛋白造成的神經(jīng)毒性作用。

通過(guò)對(duì)斑馬魚(yú)表型的觀察，經(jīng)GSK-3β抑制劑處理過(guò)后的斑馬魚(yú)會(huì)產(chǎn)生無(wú)眼無(wú)腦的表型。

3.MAO抑制劑篩選模型

通過(guò)抑制MAO-B或Bestrophin-1通道來(lái)降低生產(chǎn)和釋放γ-氨基丁酸（GABA），這樣能降低老年癡呆模型的神經(jīng)元、突觸傳遞和記憶的損傷。

通過(guò)酶標(biāo)儀檢測(cè)單胺氧化酶活性，若能抑制正常斑馬魚(yú)的單胺氧化酶活性說(shuō)明供試品為MAO抑制劑。

利用斑馬魚(yú)模型評(píng)價(jià)老年癡呆防治作用【實(shí)驗(yàn)方案】

1.氯化鋁誘導(dǎo)的老年癡呆模型

我們將受測(cè)試斑馬魚(yú)分成三組，分別是正常對(duì)照組、模型對(duì)照組和乙酰膽堿酯酶抑制劑組。其中正常對(duì)照組未攝入氯化鋁造模，模型對(duì)照組與服用乙酰膽堿酯酶抑制劑都攝入等量的氯化鋁（氯化鋁通過(guò)溶解到養(yǎng)魚(yú)用水中的方式攝入到斑馬魚(yú)體內(nèi)）。乙酰膽堿酯酶抑制劑在攝入氯化鋁的同時(shí)攝入多奈哌齊之類的乙酰膽堿酯酶抑制劑。

服用一段時(shí)間乙酰膽堿酯酶抑制劑后，我們對(duì)斑馬魚(yú)進(jìn)行行為學(xué)檢測(cè)，觀察斑馬魚(yú)的外界光暗刺激的反應(yīng)能力（反應(yīng)速度）；同時(shí)酶標(biāo)儀檢測(cè)斑馬魚(yú)體內(nèi)乙酰膽堿酯酶活性。

2.GSK-3β抑制劑篩選模型

我們將受測(cè)試斑馬魚(yú)分成2組，分別是正常對(duì)照組和GSK-3β抑制劑組（GSK-3β抑制劑氯化鋰通過(guò)溶解到養(yǎng)魚(yú)用水中的方式攝入到斑馬魚(yú)體內(nèi)）。

服用一段時(shí)間GSK-3β抑制劑后，我們對(duì)斑馬魚(yú)進(jìn)行表型觀察，若觀察到無(wú)眼無(wú)腦斑馬魚(yú)則認(rèn)為是GSK-3β抑制劑（注意要與發(fā)育緩慢區(qū)分）。

3.MAO抑制劑篩選模型

我們將受測(cè)試斑馬魚(yú)分成2組，分別是正常對(duì)照組和MAO抑制劑組（MAO抑制劑司來(lái)吉蘭通過(guò)溶解到養(yǎng)魚(yú)用水中的方式攝入到斑馬魚(yú)體內(nèi)）。

服用一段時(shí)間MAO抑制劑后，我們用酶標(biāo)儀檢測(cè)斑馬魚(yú)體內(nèi)乙酰單胺氧化酶活性。

【結(jié)果展示】

圖1. 反應(yīng)能力軌跡圖

可以看到，服用乙酰膽堿酯酶抑制劑組斑馬魚(yú)的反應(yīng)能力比模型對(duì)照組明顯改善。

圖2. 乙酰膽堿酯酶檢測(cè)

可以看到，服用乙酰膽堿酯酶抑制劑組斑馬魚(yú)的乙酰膽堿酯酶活性顯著降低與正常對(duì)照組相似，未出現(xiàn)乙酰膽堿酯酶活性明顯升高的情況。

圖3. GSK-3β抑制劑表型圖

紅色箭頭指示斑馬魚(yú)的眼睛

可以看到，服用GSK-3β抑制劑組很明顯無(wú)眼無(wú)腦。

圖4. 單胺氧化酶活性檢測(cè)

可以看到，服用MAO抑制劑組斑馬魚(yú)的單胺氧化酶酶活性與正常對(duì)照組相比顯著降低。

【評(píng)價(jià)結(jié)論】

1.在氯化鋁誘導(dǎo)的老年癡呆模型中，服用多奈哌齊的斑馬魚(yú)反應(yīng)能力較模型對(duì)照組有明顯的改善，且對(duì)氯化鋁誘導(dǎo)的老年癡呆模型斑馬魚(yú)的乙酰膽堿酯酶活性也有顯著降低的作用。

2.在GSK-3β抑制劑篩選模型中，氯化鋰誘導(dǎo)斑馬魚(yú)出現(xiàn)無(wú)眼無(wú)腦模型，具有GSK-3β抑制作用。

3.在MAO抑制劑篩選模型中，司來(lái)吉蘭具有顯著抑制單胺氧化酶活性作用。