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近期，環(huán)特生物在期刊《廣東化工》上發(fā)表題為 《甘油葡糖苷的護膚功效評價》的最新研究成果。該項目利用斑馬魚技術(shù)探究甘油葡糖苷的護膚功效。

實驗過程中，用氯化鈉溶液處理斑馬魚，使其皮膚表面失水皺縮，建立補水保濕模型；將斑馬魚尾鰭進行手術(shù)切斷處理，建立修復(fù)模型；利用 SLS（十二烷基磺酸鈉）刺激誘導(dǎo)斑馬魚產(chǎn)生皮膚表面炎癥反應(yīng)，建立舒緩功效模型；通過斑馬魚節(jié)間血管直徑的擴張程度以及血流速度評價甘油葡糖苷促進微循環(huán)的功效。

該研究基于斑馬魚實驗發(fā)現(xiàn)，甘油葡糖苷能增大斑馬魚尾部面積，促進尾鰭再生，減少皮膚表面中性粒細胞的浸潤，增大血管直徑并加速血流。實驗結(jié)果表明，甘油葡糖苷具有補水保濕、修復(fù)、舒緩及改善微循環(huán)作用，為甘油葡糖苷的相關(guān)功效研究提供了參考依據(jù)。

● 綜述

甘油葡糖苷 αGG，別名為格萊可因，是一種淡黃色液體，易溶于水，其由一分子葡萄糖和甘油通過α-1，2-糖苷鍵連接而成。甘油葡糖苷是來源于沙漠卷柏或耐鹽藍藻的一種小分子物質(zhì)，它可以保護細胞免受高溫、高滲、干旱和紫外線等惡劣環(huán)境的破壞。在日本清酒、味增和米醂中，也發(fā)現(xiàn)含有活性成分 aGG。

目前合成 αGG 的方法主要有化學(xué)合成、蔗糖磷酸化酶催化合成以及通過由鹽脅迫處理寡養(yǎng)單胞菌或藍藻等微生物合成。雖然現(xiàn)階段已有多種 αGG 的合成方式，但是已報道的 αGG 產(chǎn)物分離方法還比較少；奧地利格拉茨工業(yè)大學(xué)的 GOEDL 等通過混合活性炭與硅藻土為分離介質(zhì)從酶反應(yīng)體系中吸附-洗脫獲得了較高純度的 aGG。

甘油葡糖苷分子結(jié)構(gòu)與理化性質(zhì)*，具有低吸水性、高保濕性的特點，因此可作為化妝品原料，以提高皮膚的保濕、抗衰老等效果。有研究表明甘油葡糖苷對于羥基自由基、DPPH 自由基及超氧陰離子自由基具有清除能力。

此外，有研究通過建立一些酶保護模型證實 αGG 可以作為蛋白穩(wěn)定劑使用，能夠在高溫或冷凍干燥條件下穩(wěn)定蛋白質(zhì)等生物大分子的結(jié)構(gòu)。在保健方面，αGG 能促進益生菌生長，增強腸道耐受性。在治療過敏性呼吸系統(tǒng)疾病、保護眼角結(jié)膜、降低血糖等方面，αGG 也發(fā)揮了應(yīng)用價值。

目前關(guān)于甘油葡糖苷的功效評價方法主要有體外細胞生物法、生物化學(xué)法、人體功效評價法等，但以斑馬魚為試驗對象的甘油葡糖苷功效評價未見文獻報道。

斑馬魚是一種熱帶淡水魚，因其與人類具有較高的基因同源性、皮膚結(jié)構(gòu)相似性、免疫功能的相似性等特點而被廣泛應(yīng)用于藥品、保健食品及化妝品的替代試驗，同時，斑馬魚試驗方法具有可靠性高、試驗周期短、成本低等優(yōu)點，因而是功效評價良好的初篩方法，目前已有大量功效研究方法采用斑馬魚技術(shù)。本文旨在利用斑馬魚誘導(dǎo)多種試驗?zāi)Ｐ?，水溶性給予甘油葡糖苷進行干預(yù)，探究甘油葡糖苷補水保濕、修復(fù)、舒緩及改善微循環(huán)的護膚功效。

● 實驗部分

1.1 補水保濕功效評價模型

斑馬魚皮膚結(jié)構(gòu)與人皮膚結(jié)構(gòu)相似，具有表皮層、真皮層和皮下組織。有文獻資料表明，斑馬魚表皮具有一定的滲透壓耐受范圍，超過耐受范圍將產(chǎn)生脫水現(xiàn)象，因此使用高滲透溶液可以建立斑馬魚補水保濕的誘導(dǎo)模型。

用 0.9%氯化鈉溶液處理斑馬魚，建立補水保濕模型，水溶給予不同濃度的甘油葡糖苷（0.5，1.0 和 2.0 mg.mL-1），28℃培養(yǎng)箱孵育 18h 后，以斑馬魚尾部面積評價甘油葡糖苷的補水保濕功效。同時設(shè)置空白對照組和模型對照組。

1.2 修復(fù)功效評價模型

斑馬魚尾鰭是研究皮膚組織再生的常用實驗?zāi)Ｐ停瑢⑽馋掃M行機械損傷后，比較空白組與受試物組的尾鰭再生程度可以用于評價受試物的修復(fù)功效，目前已有大量研究采用該實驗方法。

采用手術(shù)切斷尾鰭的方法建立斑馬魚修復(fù)模型。水溶給予不同濃度的甘油葡糖苷（0.5，1.0 和 2.0 mg.mL-1），28℃培養(yǎng)箱孵育 2d 后，以斑馬魚尾鰭面積評價甘油葡糖苷的修復(fù)功效。同時設(shè)置空白對照組和模型對照組。

1.3 舒緩功效評價模型

舒緩，一般是指能改善皮膚刺激等狀態(tài)的功效作用。皮膚刺激性所表現(xiàn)出來的皮膚灼熱、紅腫等表觀現(xiàn)象通常是皮膚早期炎癥反應(yīng)發(fā)生的結(jié)果，因此可以通過炎癥反應(yīng)的抑制作用反應(yīng)舒緩功效。斑馬魚與人類具有相似的免疫應(yīng)答系統(tǒng)，炎癥反應(yīng)的發(fā)生將導(dǎo)致免疫細胞的遷移和聚集，選用轉(zhuǎn)基因中性粒細胞綠色熒光品系斑馬魚可以實時觀察中性粒細胞的遷移和聚集情況，從而以計數(shù)的方式評價受試物的舒緩功效。

建立斑馬魚皮膚舒緩模型，水溶給予 1.0 mg.mL-1 甘油葡糖苷，處理 18 h 后，在熒光顯微鏡下拍照，以皮膚表面中性粒細胞數(shù)量的統(tǒng)計學(xué)分析結(jié)果評價甘油葡糖苷的舒緩功效。同時設(shè)置空白對照組和模型對照組。

1.4 改善微循環(huán)功效評價模型

皮膚微循環(huán)的活體觀察是早期微循環(huán)研究最經(jīng)常采用的方法之一，如李慧良等應(yīng)用該技術(shù)對小鼠皮膚側(cè)面微循環(huán)的研究從而評價天然提取物的抗皮膚衰老作用。但由于技術(shù)條件要求較高，組織標本制備周期較長等原因，其應(yīng)用受到一定的限制，參照上述方法，應(yīng)用斑馬魚技術(shù)可以實現(xiàn)簡單、快速的改善微循環(huán)評價試驗。

水溶給予不同濃度的甘油葡糖苷（1.0 和 2.0 mg.mL-1），處理 24 h 后，統(tǒng)計節(jié)間血管直徑，根據(jù)節(jié)間血管直徑的統(tǒng)計學(xué)分析結(jié)果評價甘油葡糖苷對斑馬魚的節(jié)間血管直徑改善功效。

此外，利用血流分析儀檢測受試斑馬魚的節(jié)間血流速度，補充評價改善微循環(huán)功效。

● 實驗結(jié)果

1. 甘油葡糖苷促進補水保濕功效

與空白對照組相比，模型對照組斑馬魚尾部面積明顯較少，提示斑馬魚補水保濕功效評價模型造模成功。甘油葡糖苷的濃度為 0.5，1.0 和 2.0 mg·mL-1 時，與模型對照組(167353 像素)比較，P < 0.001，對斑馬魚尾部的補水保濕功效分別為 91%，70%和128%。 (見圖 1 和表 1) 。

2. 甘油葡糖苷促進修復(fù)功效

與空白對照組相比，模型對照組斑馬魚尾鰭面積明顯較少，提示斑馬魚修復(fù)功效評價模型造模成功。甘油葡糖苷的濃度為0.5，1.0和2.0mg·mL-1時，與模型對照組比較，P<0.05，修復(fù)功效分別為20%，23%和37%( 見圖1和表2) 。

3 舒緩功效

與空白對照組相比，模型對照組斑馬魚皮膚表面中性粒細胞數(shù)量明顯增多，提示斑馬魚舒緩模型建立成功。甘油葡糖苷濃度為1mg·mL-1時，斑馬魚皮膚表面中性粒細胞數(shù)量與模型對照組比較P<0.01，其對斑馬魚炎癥消退率為58% (見圖3和表3)。

4 改善微循環(huán)功效

甘油葡糖苷的濃度為1.0 和 2.0 mg·mL-1時，斑馬魚節(jié)間血管直徑分別為 8.36 和 8.86μm 與空白對照組比較，P均< 0.01，其改善微循環(huán)的功效分別為 8%和 14%。甘油葡糖苷的濃度為1.0mg·mL-1和 2.0mg·mL-1時，斑馬魚節(jié)間血液流速分別為454 μm/s和 499 μm/s，與空白對照組比較，P< 0.05，其改善微循環(huán)的功效分別為31%和44%。 (見圖4，圖5和表4，表5) 。

● 討論

在新的法規(guī)要求和產(chǎn)品發(fā)展需求下，化妝品及其原料的安全性和功效性評價顯得越來越重要，各種不同機理的檢測評價方法和模型不斷涌現(xiàn)。

斑馬魚由于其與人類基因的高同源性、生物功能和結(jié)構(gòu)的高度相似等優(yōu)勢，已成為國際第三大模式生物，斑馬魚試驗的測評結(jié)果逐漸成為人體實驗前的良好初篩方法。本文的試驗結(jié)果顯示，甘油葡糖苷的試驗濃度為0.5，1.0和 2.0mg·mL-1時，具有補水保濕功效；試驗濃度為0.5，1.0 和 2.0mg·mL-1 時，具有修復(fù)功效；試驗濃度為1mg·mL-1時，具有舒緩功效；試驗濃度為1.0和 2.0mg·mL-1時，具有改善微循環(huán)功效。

本文的研究工作可以為甘油葡糖苷在補水保濕、修復(fù)、舒緩、改善微循環(huán)等方面的功效提供參考依據(jù)。