紅四唑

紅四唑

 2,3,5-氯化三苯基四氮唑，又稱(chēng)四唑紅，簡(jiǎn)稱(chēng)TTC，TTZ，或TPTZ，一種脂溶性光敏感復(fù)合物，即可用來(lái)檢測(cè)種子的生存能力，也可用來(lái)檢測(cè)哺乳動(dòng)物組織的缺血梗塞。檢測(cè)機(jī)制在于TTC本身可作為一種氧化還原指示劑，活細(xì)胞內(nèi)的脫氫酶（尤其是線(xiàn)粒體內(nèi)的琥珀酸脫氫酶）可以將TTC還原為紅色甲臢化合物TPF（1,3,5-triphenylformazan）。對(duì)于種子或者植物組織來(lái)說(shuō)，染色結(jié)果為活組織被染成不同程度的紅色，死組織或者無(wú)生命力的組織不著色。對(duì)于缺血梗塞組織，因組織壞死脫氫酶活力喪失呈現(xiàn)蒼白色，而正常組織呈深紅色。
染色方法
1.1  染色工作液的配制
TTC通常用磷酸緩沖鹽溶液來(lái)配制，pH范圍為6.5-7.5之間，常用的工作濃度為2%，也可用1%或者更低的濃度，根據(jù)自身實(shí)驗(yàn)體系調(diào)整。
可使用以下的緩沖鹽體系配制：
1）取9.078g KH2PO4（Mw：136.09）溶于1L去離子水內(nèi)，制備成66.7mM KH2PO4儲(chǔ)存液；取9.472g Na2HPO4·H2O（Mw：137.99）溶于1L去離子水內(nèi)，制備成68.6mM Na2HPO4儲(chǔ)存液；將兩份KH2PO4儲(chǔ)存液與1份Na2HPO4儲(chǔ)存液充分混合，即得到需要的磷酸緩沖液溶液。
2）根據(jù)需要的TTC工作液濃度來(lái)制備，如加入2g TTC粉末到100ml混合的磷酸鹽緩沖液中，即得到2%的染色工作液。此時(shí)的溶液pH值在6.5-7.5之間。此工作液可裝到不透明的白色瓶或者棕色瓶子內(nèi)，4℃保存幾個(gè)月穩(wěn)定。
【注意：TTC染色液的緩沖體系可根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)習(xí)慣來(lái)調(diào)整；也可用去離子水來(lái)溶解配置成10mg/ml的儲(chǔ)存液，過(guò)濾除菌，建議此法染色液當(dāng)天使用?！?br />1.2 染色方法（動(dòng)物組織）
1）取新鮮組織切片放到裝有TTC染色液的染色容器內(nèi)，37℃避光孵育15-30min，邊孵育邊觀察顏色變化；【注意：TTC染色液可重復(fù)使用2-3次，可將用過(guò)的TTC染色液放到新的容器內(nèi)繼續(xù)使用。】
2）【可選】輕柔的吸取緩沖液（如1×PBS）將組織表面多余的染色液沖洗掉；
3）此時(shí)即可觀察或者拍照。若需長(zhǎng)久保存，用4%多聚甲醛溶液（貨號(hào)：P1110）固定10-20min。
注意事項(xiàng)
1）本品具有微量的光和熱敏感性，使用以及存放的過(guò)程中避免長(zhǎng)時(shí)間曝光或者接觸到過(guò)高溫度下。
2）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。