技術(shù)文章
pcr實(shí)驗(yàn)室小問(wèn)題大困難,知道就能輕松應(yīng)付
發(fā)布時(shí)間:2020-12-16相信做過(guò) PCR 實(shí)驗(yàn)的伙伴,一定有跟我一樣的感受,坑多,且讓人防不勝防!
辛辛苦苦做半天,PCR 做出來(lái)還是假陽(yáng)性......
做完 PCR,蒸發(fā)了一半,開(kāi)蓋手抖灑了......
PCR 管居然融化變形,蓋打不開(kāi)了?
而且 PCR 擴(kuò)增效率ji低......
令人抓狂是好不容易出一次滿意結(jié)果,遲遲不能復(fù)現(xiàn).......「坑」雖多,吐槽完,實(shí)驗(yàn)仍要繼續(xù),如何提前避開(kāi)才是重中之重。造成這些結(jié)果的原因有很多,模板質(zhì)量不佳、引物、退火溫度不合適等等,但還有一個(gè)容易被忽略因素:PCR 耗材,它出問(wèn)題會(huì)導(dǎo)致出現(xiàn)樣品蒸發(fā)、漏液等實(shí)驗(yàn)事故,甚至直接導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗。
PCR 反應(yīng)是升降溫循環(huán)反應(yīng),樣品蒸發(fā)的影響不容忽視,對(duì)于如XG檢測(cè)應(yīng)用的 qPCR 實(shí)驗(yàn),體系的體積穩(wěn)定性及透光性對(duì)檢測(cè)的靈敏度也有干擾。雖然高透的管蓋、8 聯(lián)管管蓋起到了一定的保護(hù)作用,但密封效果一般,關(guān)蓋與開(kāi)蓋過(guò)程繁瑣、高溫讓蓋子變形等情況,會(huì)直接造成漏液、氣溶膠污染等問(wèn)題,想想就令人頭大......為了盡可能規(guī)避以上問(wèn)題出現(xiàn),不讓 PCR/qPCR 實(shí)驗(yàn)付之東流,在使用 PCR 板時(shí),自粘膜逐漸成為實(shí)驗(yàn)優(yōu)選。但不同來(lái)源的自粘膜的品質(zhì)參差不齊,密封不嚴(yán),透光性不佳,不能適用于小通量也是使用 PCR/qPCR 膜的制約之處。
qPCR 高透膜:用于 PCR 板或者酶標(biāo)板,幾乎適合所有板型。
高度透明并具有ji小的自體熒光,適用于 qPCR、ELISA 等熒光或顯色分析實(shí)
壓力敏感型膜,只有在施加壓力時(shí)才具有粘性,因此封閉時(shí)反應(yīng)孔上方的膜粘性很小,可有效減少樣品黏附(原理見(jiàn)下圖)

壓力敏感型膜的原理

BRAND 壓敏型高透膜
(貨號(hào) 781391)
普通 PCR 膜
用于 PCR 板或者酶標(biāo)板,幾乎適合所有板型。
透光,適合肉眼或者光學(xué)觀察,適用于 PCR、ELISA、EIA 等顯色分析實(shí)驗(yàn)。
邊條便于拿取,強(qiáng)粘性保證密封效果。

BRAND PCR 膜(貨號(hào) 781390)
PCR/儲(chǔ)存膜
用于 PCR、ELISA 或樣品儲(chǔ)存。適合 -80 ℃ 樣品冷藏,耐受 DMSO 與溶透明可用于顯色分析實(shí)驗(yàn)或肉眼觀察。可撕開(kāi)重復(fù)使用。
BRAND PCR/儲(chǔ)存膜(貨號(hào) 701367)
能夠封住 PCR 板的膜千篇一律,真正耐高溫、蒸發(fā)少、透光好的膜。實(shí)驗(yàn)表明,BRAND 壓力敏感型高透膜可以更有效地密封 PCR 板,減少蒸發(fā)(見(jiàn)下圖)。

使用 BRAND 壓敏型高透膜(781391)與不同 PCR 自粘膜 25 個(gè)循環(huán)后的蒸發(fā)率比較實(shí)驗(yàn),PCR 板為 BRAND 781375。實(shí)驗(yàn)顯示 BRAND 壓敏型高透膜(781391)(左 1)可顯著減少 PCR 反應(yīng)體系的蒸發(fā)。
想要 PCR 實(shí)驗(yàn)不踩「坑」,選對(duì)膜很重要,溫馨提示:有了膜可別忘了封膜神器哦!

BRAND 封膜用刮板(貨號(hào) 701381)
正所謂:
古今 P-C-R,
貼膜鎖乾坤,
多少實(shí)驗(yàn)事,
都付笑談中…
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